袁爱华 ，骆瑜 ，王维亚 ，林志超

    (1.南昌市食品药品检验所，江西 南昌 330096；2.南昌市食品安全检测与控制重点实验室, 江西 南昌 330096)

    坚果及籽类制品包含品种多达20 多种，其口味独特，营养价值丰富，含有蛋白质、脂肪、碳水化合物、维生素、微量元素、膳食纤维和多种不饱和脂肪酸。该类产品具有抗氧化、软化血管、抑制肥胖和降低糖尿病发病率等作用[1,2]。随着人们生活条件的改善和保健意识的提升,对坚果与籽类制品的需求量日见增长。但坚果与籽类制品在生产、储存及运输时极易受到霉菌的污染,食品的深加工和网购的流行，更让产品质量难以保证。欧盟食品和饲料快速警报系统(RASFF)的报告数据显示，真菌毒素是坚果和籽类食品中报告频率最高的有害物质[3,4]。真菌毒素是霉菌产生的有害次生代谢产物[5]，食源性霉菌已成为食品安全风险的重要来源之一。霉菌的检测主要有传统培养法、生化检测法、代谢学检测法、流式细胞技术法、实时光电微生物检测法及分子生物学检测法等[6]。传统培养法作为国标金标准，存在检测时间长、操作复杂及工作量大的缺点。随着现代科学技术的发展和对监管时限要求的提高, 快速高效的检测方法逐渐受到广泛关注。PCR 检测技术以其快速、简便、准确等优点在国际上得到了广泛的认可[7]，被誉为现代快速方法的金标准。在霉菌检测方面，预计PCR 检测比传统培养方法快4～6d。由于霉菌PCR 检测技术起步较晚，加之霉菌生理和形态的多样化和复杂性，及食品成分的基质效应也可能影响菌体生长和PCR 扩增[8],致使霉菌PCR 检测技术应用并不广泛。黑曲霉菌是增菌培养基的霉菌质控菌珠,黄曲霉菌和青霉菌是农产品贮存过程中出现的主要致腐菌[9-12]。为提高坚果及籽类制品中霉菌的检测时效,本研究以黑曲霉、青霉菌、黄曲霉菌为实验菌珠,通过改良前增菌培养，优化扩增条件，建立适用于坚果及籽类制品的霉菌PCR 检测技术, 同时对本市抽样的检品进行检测, 并与传统分离培养法进行对比研究，确认方法学的适用性和有效性，实现对坚果及籽类制品中霉菌的快速检测。

    1 材料与方法

    1.1 实验材料 黑曲霉菌珠 CMCC(F)98003(定量1000～2000 CFU/颗,购自北京三药科技开发公司)，黄曲霉菌、青霉菌为本实验室保存；花生仁、葵花子、瓜子、核桃、花生等为超市自购；68 批检品为2019 年抽样样品。

    1.2 仪器与试剂 西班牙BioII-Advance4 生物安全柜、上海一恒THZ-100 恒温培养摇床、HIRYAM AHVA-85 高压蒸汽灭菌锅、 尼康XS212 显微镜、杜邦BAX SystemQ7 全自动病原微生物检测系统、法国Interscience BagMixer400s 均质器、 北京六一生物科技DYY-6C 型电泳仪、 上海勤翔科学仪器1880 凝胶成像系统 ......