芦亚君，邢维媚，夏乾峰

    (海南医学院热带医学与检验医学院，海南 海口 571199)

    粪类圆线虫(Strongyloides stercoralis)是一种土源性蠕虫，流行于热带和亚热带地区[1,2]。目前，粪类圆线虫病常用的诊断方法是在患者粪便中检出杆状蚴、丝状蚴或虫卵。在光学显微镜下检获虫体的病原学诊断方法虽然简便快捷,但敏感性和特异性低。粪类圆线虫的虫卵和幼虫均与钩虫、东方毛圆线虫在形态上区别不明显，易混淆[3]。

    本研究拟用COXⅠ基因和ITS 基因作为分子标记对粪类圆线虫进行分子生物学鉴定[4]，以明确诊断。以粪类圆线虫病患者的粪便作为检验物纯化粪类圆线虫虫体,提取虫体 DNA，PCR 扩增COXⅠ和ITS 基因，探讨分子鉴定在粪类圆线虫病诊断的应用,为临床上确诊粪类圆线虫感染提供明确的分子生物学依据。

    1 材料与方法

    1.1 虫体来源 2018 年5 月海南省某医院粪类圆线虫病腹泻患者的粪便。

    1.2 试剂 动物组织直接PCR 试剂盒购于北京百泰克生物技术有限公司，2×TSINGKE Master Mix(blue)购于北京擎科新业生物技术有限公司，DL20 00 DNA Marker 购于北京庄盟国际生物基因科技有限公司、核酸染料GelRed 购于biosharp，引物由广州天一辉远基因科技有限公司合成。

    1.3 仪器 高效组织细胞破碎仪购于湖北新纵科病毒疾病工程技术有限公司,小型台式高速冷冻离心机 Eppendorf 5424R、MASTERCYCLER PRO PC R 仪购于 eppendorf(中国)有限公司；L1 型低温连接仪购于珠海黑马医学仪器有限公司,全自动数码凝胶成像分析系统Tanon-1600 购于上海天能科技有限公司 ......