薛萌，刁云辉，樊宏伟

    (南阳市中心医院消化内科一病区，河南 南阳 473009)

    食管癌是常见的消化道恶性肿瘤之一，病灶内癌细胞的迁移能力极强，容易在早期出现肿瘤病灶的浸润，单纯手术切除后的生存率较低[1,2]。食管癌的发生涉及多基因、多环节、多因素且未完全阐明。小 RNA (microRNA，miR) 是一类长度 18-22nt 并在转录后水平调控基因表达的一类非编码RNA，与靶基因 mRNA 的 3’非编码区(3’-untranslated region，3’UTR)结合后阻碍 mRNA 的翻译，最终实现对靶基因表达的抑制。在恶性肿瘤组织中，多种miRs 的表达存在异常，靶向原癌基因的miRs下调或靶向抑癌基因的miRs 上调均起到促癌作用[3-5]。miR-33b 是一类具有抑癌作用的miR，已经在胃癌、 黑色素瘤等恶性肿瘤细胞中被证实能够靶向高迁移率族蛋白A2 (high mobility group A2，HMGA2)基因并抑制细胞迁移[6,7]。但miR-33b 在食管癌发生发展中的具体作用机制及HMGA2 是否受到miR-33b 的靶向调控尚不完全清楚。为此，本研究具体分析了miR-33b 靶向HMGA2 基因表达抑制食管癌细胞迁移的作用。

    1 材料与方法

    1.1 实验材料 食管癌Eca9706 细胞系购自中科院上海生命科学院细胞资源中心，DMEM 培养基、胎牛血清(FBS)购自 Gibco 公司，阴性对照(NC)模拟物(序列：5’-GUUAUCAGUGACUAGCGUA-3’)、miR-33b 模拟物(序列：5’-GCUAGCAUGCUGAUGUCA-3’)、NC-siRNA(序列：5’-UGCAUGUACGC UAGCUAU-3’)、HMGA2-siRNA (序列：5’-UAGC UAGGCUAGCUAGUG-3’)、pcDNA3.0 空白质粒、pcDNA3.0-HMGA2 质粒均购自上海吉玛公司，双荧光素酶报告基因(Psi-check2 质粒)及检测系统均购自Promega 公司，Lipofectamine2000 试剂购自Invitrogen 公司，Transwell 小室购自 Corning 公司，DIO 细胞膜绿色荧光染液购自上海碧云天公司，miRNA 提取试剂盒、miRNA cDNA 第一链合成试剂盒、miRNA 荧光定量PCR 检测试剂盒、 培养细胞/细菌总RNA 提取试剂盒、石蜡包埋组织切片总RNA 提取试剂盒、FastKing 一步法除基因组cDNA第一链合成预混试剂购自北京天能公司 ......