郭鹏波，章波，王彦红，高利飞

    (1.郑州儿童医院 儿科医学研究所，河南 郑州 450000；2.安图生物，河南 郑州 450000)

    百日咳是由百日咳鲍特菌(Bordetella pertussis)侵入人体呼吸道而引起的急性呼吸道传染病[1]。主要特征是阵发性痉挛性咳嗽，且咳嗽时间为2～3个月，故名"百日咳"[2]。百日咳是由革兰阴性杆菌引起的高度传染性呼吸道疾病[3]。尽管疫苗覆盖率很高，但近日百咳仍在复苏[4]，且对人类健康产生巨大威胁[5]。由于百日咳鲍特菌毒性区和致病因子比较复杂，在最近的10～20年内，全球百日咳患病人数有明显的上升趋势[6]，且在我国陕西、天津和新疆等地百日咳患者也有增加的趋势[7-9]。由于中国的百日咳发病率呈现逐年递增的趋势，如何在发病早期快速诊断和检验出百日咳鲍特菌，已经成为当前的热点。目前已经报道的有细菌培养、酶联免疫检测法、核酸检测法等多种方法，核酸检测法虽然敏感度最高[10]，但操作技术要求高，限制了本方法的临床应用。本文对百日咳的荧光定量实验室诊断方法进行改进优化，建立了快速的便携式百日咳鲍特菌核酸检测方法。

    1 材料与方法

    1.1 试验材料 临床样本来自郑州儿童医院，百日咳鲍特菌DNA 来源于河南CDC，细菌基因组DNA提取试剂盒购于凯杰生物公司，PCR 产物纯化及质粒DNA 抽提试剂盒购自TaKaRa 公司，2×Taq PCR MasterMix(KT201)购自北京天根生化技术有限公司,引物合成和测序由上海生工生物有限公司、抗干扰Taq 酶购自百奥莱博。主要仪器有Thermo Nano-Drop 2000c 超微量紫外分光光度计、Biometra TT100PCR 仪、博医康Pilot5-8S 冷冻干燥机及安捷伦荧光定量PCR 仪。

    1.2 质粒标准品的制备 以百日咳鲍特菌DNA 为模板 ......