李航，黄昊

    (开封市中心医院 检验科，河南 开封 475000)

    慢性阻塞性肺疾病(COPD)的主要特征为持续性气流受限且多呈进行性发展，并伴有肺功能进行性减低，还可伴随心血管疾病、代谢综合征等并发症[1]。 研究表明，相关炎症信号通路激活、炎症因子异常表达在气道壁和肺实质损伤中具有关键性作用[2]。 Toll 样受体(TLRs)是机体重要的模式识别受体之一，而核因子κB(NF-κB)位于TLRs 下游信号通路的关键位置，TLRs-NF-κB 信号通路过度激活情况下可导致炎症反应失控，参与呼吸道及肺组织损伤、破坏[3]。 白细胞介素-1 受体相关激酶(IRAK)可介导包括TLRs 在内的多细胞受体信号，在多种炎症细胞信号转导网络中具有重要调节作用[4]。 本研究通过检测COPD 患者外周血单个核细胞(PBMCs)中TLR2/4-NF-κB 及IRAK1/4 信号通路表达，旨在探讨其在COPD 发病中的作用，为COPD 的防治提供参考依据。

    1 资料与方法

    1.1 一般资料 本研究所有受试者均自愿参与且签署知情同意书，研究设计经医院伦理委员会审核批准通过。 选取2018年1月至2019年6月期间，在本院就诊并符合入选标准的COPD 患者90例：纳入标准：⑴符合COPD 的临床诊断标准[5]；⑵年龄≥40岁； ⑶近期未使用激素类药物。 排除标准：⑴合并哮喘、肺结核等其他呼吸系统疾病者；⑵肺部及其他脏器系统恶性肿瘤病史或先病者；⑶合并严重心、脑、肝、肾及血液系统疾病者；⑷合并高血压、糖尿病等其他慢性疾病者；⑸结缔组织病、寄生虫感染者。参照相关诊疗指南[5,6]，根据是否处于急性发作期分为稳定期组(n=48)与急性加重期组(AECOPD 组，n=42)2 个亚组。

    另选同期在本院接受健康体检的性别、年龄匹配的志愿者90 例作为正常对照组，纳入标准：⑴肺功能正常，无呼吸系统病史；⑵既往身体健康状况良好，无慢性疾病史、恶性肿瘤史。 排除标准：⑴重要脏器器质性病变； ⑵近2 个月内发烧或其他感染性疾病； ⑶经体格检查及胸X 线片检查显示异常者。

    1.2 检测方法

    1.2.1 PBMCs 提取 所有受试者均隔夜空腹8h 以上，晨取空腹外周静脉血5 ml，以肝素钠抗凝，采用Ficoll Hypaque 密度梯度离心法(转速2000r/min 离心30min)离心，留取白膜层细胞，采用PBS洗涤2 次，1500r/min 离心10min，获取PBMCs。

    1.2.2 TLRs、NF-κB 及IRAK mRNA 检 测 采 用Trizol 法提取RNA ......