高娟，邢海洲

    (郑州大学第一附属医院血液病实验室，河南 郑州 450052)

    淋巴瘤是血液系统恶性肿瘤，弥漫大B 细胞淋巴瘤(diffuse large B cell lymphoma，DLBCL)是常见的恶性淋巴瘤，目前临床上多采用利妥昔单抗联合化疗的治疗方法，因治疗手段单一且部分患者易复发，所以需要研发新的治疗手段，为患者临床治疗提供新方向[1,2]。 沙棘(Hippophae rhamnoides L.)是一种传统中药，含有多种天然活性物质，其提取物主要有类胡萝卜素、黄酮类化合物、多糖和沙棘油等，具有杀菌、抗氧化、增加免疫力、抗癌抑瘤等作用[3]。 有研究发现沙棘总黄酮可增强心功能和对血管内皮细胞保护作用，从而发挥抗心肌缺血的作用[4]。 沙棘黄酮可抑制人前列腺癌PC-3 细胞增殖，并诱导细胞凋亡[5]。 但沙棘提取物对淋巴瘤细胞增殖、凋亡的影响还尚未清楚。 CD68是巨噬细胞的表面抗原标记，肿瘤相关巨噬细胞(Tumor associated macrophage，TAM)是淋巴瘤微环境的重要成分，TAM 数量在DLBCL 中增高，是其预后不良的指标[6]。 有研究发现CD68 在原发性中枢神经系统淋巴瘤中高表达，与较差的总体存活和无进展存活相关，影响患者预后[7]。 胃癌组织中CD68 过表达，可作为判断胃癌病情的参考指标[8]。本实验旨在研究沙棘提取物对淋巴瘤细胞增殖、凋亡的影响及其机制是否与CD68 有关。 为淋巴瘤的治疗提供新思路和参考依据。

    1 材料与方法

    1.1 细胞与试剂 人B 淋巴瘤细胞Raji 购自上海君瑞生物技术有限公司。 沙棘提取物购自西安天瑞生物有限公司； 胎牛血清、RPMI1640 培养基购自美国Gibco 公司；LipofectamineTM 2000 转染试剂盒、四甲基偶氮唑盐比色法(MTT)试剂盒购自美国Invitrogen 公司； 膜联蛋白V-异硫氰酸荧光素(Annexin V-FITC)和碘化丙锭(PI)试剂盒、二辛可宁酸(BCA)试剂盒、ECL 化学发光液购自碧云天生物技术研究所；抗体购自美国Sigma 公司；载体质粒购自上海基屹生物科技有限公司。 Thermo FC 酶标仪购自美国Thermo 公司；FACS caliber 流式细胞仪购自美国BD 公司。

    1.2 方法

    1.2.1 细胞培养 将人B 淋巴瘤细胞Raji 复苏后接种于含10%胎牛血清的RPMI1640 培养基中，在37℃、5%CO2的恒温箱中培养，1～2d 换一次新鲜培养液 ......