章伟慧，杨开勇

    (1.江苏民政康复医院检验科，江苏 南京 210000；2.南京中医药大学医学院 整合医学学院，江苏 南京 210023)

    中晚期非小细胞肺癌(NSCLC)患者中，表皮生长因子受体(EGFR)突变可有效提高患者对免疫治疗的应答率，使患者从中受益[1-2]。 在肺癌中，EGFR 突变可诱导细胞程序性死亡-配体1 (PDL1)上调[2]。 PD-L1 是一种免疫检查点蛋白，在多种肿瘤细胞，包括NSCLC 表面上呈高表达，与T 细胞膜上受体PD-1 结合，抑制T 细胞的功能，诱使T 细胞耗竭[3]。 有多种分子机制参与PD-L1 的调控， 其中转录后调节扮演重要的角色。 MicroRNA(miRNA) 是一类由内源基因编码的长度为18-25个核苷酸的非编码单链RNA 分子，主要参与转录后基因表达调控[4]。 MicroRNA-320a(miR-320a)在多种恶性肿瘤中均异常低表达，包括结直肠癌、乳腺癌和肺癌等[5-6]。此外，miR-320a 具有调节细胞增殖、凋亡、侵袭等多种生物学功能[5-6]。 例如，miR-320a 可抑制肺腺癌细胞的增殖[6]。 然而，关于miR-320a 调节PD-L1 的表达以及免疫抑制尚无研究报道。 因此，研究miR-320a 靶向PD-L1 介导肿瘤免疫抑制及其分子机制， 为EGFR 突变的肺癌患者接受免疫治疗提供参考依据。

    1 材料与方法

    1.1 材料 非小细胞肺癌细胞株H460、A549、HCC827 和H1975 均来自于中科院上海细胞库；RPMI1640、DMEM 培养基和胰蛋白酶均购自美国Gibco 公司； 胎牛血清购自上海依科赛公司；miR-320a 茎环结构特异性逆转录试剂盒、NC mimics 和miR-320a mimics 均购自广州市锐博公司；双荧光素酶报告基因检测试剂盒购于美国Promega 公司；Annexin V-FITC/PI 细胞凋亡检测试剂盒购于上海翊圣公司； 人外周血淋巴细胞分离液购于天津市灏洋公司； 所有的引物和Trizol 总RNA 抽提试剂盒购自上海生工； 鼠抗PD-L1 单克隆抗体购自武汉三鹰生物技术有限公司；鼠抗GAPDH 单克隆抗体和HRP 标记山羊抗兔或鼠IgG 二抗以及山羊抗鼠IgG H&L (Alexa Fluor594)红色荧光二抗购自美国Abcam 公司 ......