糖尿病足是指糖尿病患者由于合并神经病变和各种不同程度末梢血管病变而导致下肢感染、溃疡和(或)深部组织破坏，属于糖尿病常见严重慢性并发症，也是糖尿病患者致残主要原因之一。通过对糖尿病足截肢标本的分子生物学研究，进一步探讨糖尿病足的发病机制，论述其与中医辨证分型的相关性。

    1 材料与方法

    1.1 材料

    100例糖尿病足截肢标本均来自天津中医药大学第一附属医院2005年8月至2007年7月住院患者。截肢患者中男61例，女39例，年龄54～88岁，平均68.3岁。截肢患者糖尿病病程最短8年, 最长31年, 平均(18±3.7)年。

    1.1.1 诊断标准 糖尿病足的诊断标准采用2000年中华医学会糖尿病学分会第2届糖尿病足会议所制定的 “糖尿病足(肢端坏疽)检查方法及诊断标准”。

    1.1.2 截肢标准 参照国际糖尿病足工作组编写的《糖尿病足国际共识》中关于“大截肢的定义、标准和指标”执行。

    1.1.3 排除标准 有严重的手术禁忌证、动脉硬化闭塞症、急性动脉栓塞、雷诺病等其它肢体缺血性疾病。

    1.1.4 中医辨证分型标准 参照《中医外科学(第7版)》及《中药新药临床研究指导原则·脱疽》之中医辨证分型方案分为气血两虚瘀阻、气阴两虚瘀阻、脉络热毒型3种证型。

    1.2 方法

    1.2.1 标本的留取 采取多层面留取，即按小腿上部、内踝、足背3个部位分别留取。标本经过10%甲醛溶液固定，常规石蜡包埋，备用。

    1.2.2 设备与试剂 α-肌动蛋白(α-actin)鼠抗人单克隆抗体(天津市津脉基因测绘技术有限公司提供)；SP-9000免疫组化染色试剂盒；ZLI-9031浓缩型DAB试剂盒(均由北京中杉金桥生物技术有限公司提供)。

    1.2.3 免疫组织化学法 标本常规石蜡包埋, 4μm连续切片,采用SP法进行免疫组化染色,染色过程严格按试剂盒染色程序进行 ......