曾旭 李莉 业宁 姚辉 刘志华 秦民坚

    2010版《中国药典》规定威灵仙为毛茛科植物威灵仙ClematischinensisOsbeck，棉团铁线莲ClematishexapetalaPall.或东北铁线莲ClematismanshuricaRupr.的干燥根及根茎[1]。威灵仙具有祛风湿，通经止痹痛等功效，凡风湿痹痛，麻木不仁，无论上下，皆可应用，是治疗风湿痹痛的要药。作为中国常用中药由于用药历史悠久，分布范围广泛，地区用药习惯差异较大，威灵仙药材使用混乱现象十分严重。北方常见百合科菝葜属Smilax植物作威灵仙入药，而南方常见以毛茛科铁线莲属Clematis植物作威灵仙入药[2,3]。云南部分地区菊科植物显脉旋复花InulaneruosaWall.的根茎及根作威灵仙入药。四川地区，金粟兰科植物草珊瑚Sarandraglabra(Thunb.)NaRai的干燥根茎及全草作铜脚威灵仙入药[4]。由于缺乏专业的鉴定人员加之市场需求量大致使威灵仙药材常借不应求，广东地区曾发生过威灵仙与桃耳七混用的情况，造成数十人中毒的严重后果[5]。也曾出现过将毛茛科植物芍药PaeonialactifloraPall.的干燥须根加工染色来冒充威灵仙使用[6]。由此我们急需一种迅速、简便有效的方法来鉴别威灵仙药材与其混伪品，为保证药材的真实性和指导临床用药安全提供科学依据，有必要对威灵仙正品来源与其各地混用品种进行鉴别研究。

    DNA条形码(DNA barcoding)是近年来生物分类和鉴定的研究热点和方向，该技术是利用基因组中一段公认的标准的、相对较短的DNA片段来对物种进行准确鉴定。通过种间具有足够的变异、种内特异性而创建的一种新的生物身份识别系统，从而实现对物种的快速自动鉴定[7,8]。自2003年由加拿大分类学家PaulHebert首次选取以线粒体细肥色素C氧化酶亚基(COI)对动物物种进行分析，发现无论在哪个分类水平上该基因都具有良好的识别能力，该技术得到了各国专家的广泛关注[9,10]。对于植物来说，通用的DNA条形码序列仍未最终确定世界各地者都称极投入到植物通用条形码的研究当中，得到了初敊的可喜成果。陈士林课题组选取真核生物rDNA位于5.8S和26S rRNA之间的一段顺反子ITS2序列进行研究，发现ITS2序列不仅可以用于植物的DNA条形码研究，而且对于动物的DNA条形码研究也具有重要的意义，在中药材的物种鉴定方面具有潜在的研究价值[11-18]。本研究即是利用ITS2序列对威灵仙基源植物及其多种混伪品进行DNA条形码鉴别研究，为该药材的准确鉴定提供分子依据 ......