李剑瑜 刘毅 高波 戴富林 武凡

    现在广泛认为脂多糖(liposaccharide，LPS)是导致脓毒血症、败血症休克的直接原因，并可导致多功能不全综合征(multi organ dysfunction syndrome，MODS)发生，而肝脏则是MODS最早受损和受损最为严重的脏器[1，2]。由于缺乏简便有效的治疗药物，对MODS的治疗至今未取得突破性的进展。三七皂甙Rg1是中国传统中草药三七的单体成分，其对急性肝损伤的作用和保护机理，目前鲜见报导。本实验用透射电镜、DNA凝胶电泳、单细胞凝胶电泳法(single cell gel electrophoresis assay，SCGE，又称慧星电泳)探讨LPS所致肝细胞损害的特点，并探讨三七皂甙Rg1抗肝细胞损害的作用及作用机理，为急性肝细胞损伤的治疗决策提供理论基础。

    1 材料与方法

    1.1 主要试剂

    LPS、胶原酶Ⅳ、percoll均购自sigma公司；triton x-100购于Furka公司，三七皂甙Rg1为昆明植物研究所产品。

    1.2 实验动物

    Wistar大鼠32只，体重(200±12)g。

    1.3 实验方法

    1.3.1 肝细胞分离与纯化 胶原酶原位灌流法分离大鼠肝细胞，参照文献[3]进行。取Wistar大鼠32只，随机分为4组，每组8只，胶原酶原位灌流法分离大鼠肝细胞后用台盼蓝排除试验检测肝细胞存活率>90%，计算细胞浓度，调整细胞数为106个/ml。于正常对照组、LPS组、LPS+Rg1组、LPS+Quinacrine组分别加入20mmol/L PBS、3mg/L LPS、3mg/L LPS+20mmol/LRg1、3mg/L LPS+5μmol/L Quinaceine，于施加因素后0、2、4、6、8、12小时分别收集肝细胞和肝细胞培养液进行各指标测定。

    1.3.2 透射电镜观察 肝细胞收获后，离心弃上清，PBS漂洗三次，2%戊二醛液固定，1mol/L二甲砷酸缓冲液漂洗，1%四氧化锇固定，丙酮系列脱水，环氧树脂包埋，切片染色后观察 ......