隆献 何泽云 周艳利 罗寅亮 李岩岩 徐文峰 李旭华

    肾间质纤维化以细胞外基质在肾间质过量积聚、肾脏组织结构破坏及功能丧失为特征，是多种慢性肾脏疾病走向肾功能衰竭的主要病理改变。其发病机制通常认为与上皮细胞转分化、炎症反应、细胞凋亡及多种细胞因子的共同作用等有关。近年来HGF作为一种具有负性调控肾纤维化效应的肾脏保护因子得到了广泛关注[1]。

    以往研究显示，六味地黄丸能促进5/6肾切除大鼠残肾肾小球化生、延缓肾切除大鼠肾组织纤维化[2-3]，但其具体作用机制尚未得到完全阐明。本实验拟通过研究HGF及其特异性受体c-Met在5/6肾切除大鼠模型残肾的表达及六味地黄汤对其表达的影响，探讨六味地黄汤抗肾纤维化的可能作用机制，为中医药防治肾间质纤维化提供思路和实验基础。

    1 材料与方法

    1.1实验材料

    1.1.1实验动物SD大鼠40只，6～8周龄，重量180～220 g，由湖南斯莱克景达实验动物有限公司提供，批号：SCXK(湘)2009-0004。大鼠饲养环境保持通风、恒温，每日更换垫料，定期消毒笼具；每天给予12小时灯光照射。

    1.1.2主要试剂兔抗大鼠HGF多克隆抗体(BAO911)，购自武汉博士德生物工程有限公司；兔抗大鼠c-Met多克隆抗体(BS-0668R)，购自北京博奥森生物技术有限公司；HRP标记山羊抗兔IgG多聚体(PV-9001)、DAB显色剂试剂盒(AR1022)，均购自北京中杉金桥生物技术有限公司。

    1.1.3实验药物六味地黄汤(熟地黄24 g、山茱萸12 g、山药12 g、泽泻9 g、茯苓9 g、牡丹皮9 g)购自湖南中医药大学第一附属医院药剂科，由课题组自行制备药液。制备方法：先将药材用相当于药材2倍的自来水浸泡2小时，武火煮沸后再文火煎熬30分钟 ......