杨悦 孔祥英 万红叶 苏晓慧 林娜

    地乌三萜皂苷W1对破骨细胞分化和骨吸收功能的影响

    杨悦 孔祥英 万红叶 苏晓慧 林娜

    目的探讨地乌三萜皂苷类成分W1对体外破骨细胞分化及骨吸收功能的影响。方法3个不同浓度(0.0625，0.125，0.25 μg/ml)的W1与核因子-κB受体活化因子配体(receptor activator of nuclear factor kB ligand，RANKL)诱导的小鼠单核/巨噬细胞RAW 264.7共孵育7天，抗酒石酸酸性磷酸酶(tartrate resistant acid phosphatase，TRAP)染色观察TRAP阳性多核细胞的形成，甲苯胺蓝染色及扫描电镜观察骨吸收陷窝的形成，图像分析计算骨吸收陷窝面积百分比；同3个浓度的W1与RANKL诱导的RAW264.7细胞共孵育24小时后收集细胞上清液，放射免疫法检测肿瘤坏死因子α(tumor necrosis factor-α，TNF-α)的含量；甲基噻唑基四唑(methyl thiazolyl tetrazolium，MTT)法检测W1对RAW264.7细胞毒性影响。结果RANKL组诱导RAW 264.7细胞形成多量TRAP阳性多核细胞，形成明显的骨吸收陷窝，并诱导TNF-α在RAW264.7细胞上清中异常高表达；与RANKL组相比，3个浓度的W1均能显著减少TRAP阳性细胞数(P1 材料

    1.1 细胞

    小鼠单核/巨噬细胞系RAW 264.7(由中国医学科学院基础医学研究所细胞库提供)，加入含10%的胎牛血清、1%双抗和谷氨酰胺的高糖(dulbecco’s modified eagle’s medium，DMEM)培养基，置于5% CO2，37℃培养箱中常规培养。细胞生长至80%～90%融合后进行传代，2～3天传代1次。

    1.2 试剂

    胎牛血清，高糖DMEM培养基(美国GIBCO公司)；小鼠重组可溶性核因子κB受体活化因子配体(soluble receptor activator of nuclear factor kB ligand，sRANKL)(英国Peprotech公司)；3-(4，5-二甲基噻唑-2)-2，5二苯基四氮唑溴盐(3-[4，5-dimethylthiazol-2-yl]-2，5-diphenyl tetrazolium bromide，MTT)、甲苯胺蓝、多聚赖氨酸、抗酒石酸酸性磷酸酶(tartrate resistant acid phosphatase，TRAP)染色试剂盒(美国Sigma公司)；W1(广州康和药业有限公司提供)；牛骨片(北京荣志海达生物科技有限公司)；小鼠肿瘤坏死因子α(tumor necrosis factor ......