陈建武 王晓娟

    ·论著·

    黄连碱对软骨细胞增殖及转化生长因子β1mRNA基因的表达的影响

    陈建武 王晓娟

    目的观察黄连碱对Sprague Dawley大鼠关节软骨细胞体外增殖及转化生长因子β1mRNA基因表达的影响，探讨其治疗骨关节炎的作用及可能机制。方法取SD大鼠关节软骨，剪碎后，采用酶消化法原代分离培养软骨细胞，取处于对数生长期第3代细胞随机分组，实验组加入含10 μm黄连碱的培养基，对照组仅加入普通培养基。培养48小时后在倒置显微镜下观察软骨细胞形态，MTT法检测黄连碱在1，3，5，7天对软骨细胞增殖影响，实时荧光定量PCR分别检测培养7天后实验组和对照组细胞转化生长因子β1mRNA表达。结果培养48小时后实验组软骨细胞生长密集程度明显优于对照组；MTT检测也显示实验组细胞增殖情况优于对照组；培养7天后实验组转化生长因子β1mRNA表达显著高于对照组。结论黄连碱能促大鼠软骨细胞增殖，并提高转化生长因子β1mRNA的表达，提示这可能是其治疗骨关节炎的可能机制之一。

    黄连碱； 软骨细胞； 增殖； 转化生长因子β1

    骨性关节炎(osteoarthritis，OA)是临床最常见的关节疾病之一，其最主要的病理性改变是进行性关节软骨退变，从而导致周围骨质和关节滑膜发生病理改变，骨性关节炎发展到终末期会导致关节畸形而丧失功能[1]。关节软骨细胞的过度凋亡是骨性关节炎发生发展的重要原因。软骨细胞是关节软骨中唯一的细胞成分，各种细胞因子调节着软骨细胞的增殖、分化及代谢，并始终贯穿于关节软骨修复的过程中，目前国外研究已经证实转化生长因子β1(transforming growth factor-beta 1， TGF-β1)在软骨细胞修复中起着重要的作用[2]。中药黄连为毛茛科植物黄连CoptischinensisFranch的干燥根茎，中医认为长期应用具有清热、燥湿、解毒、泻火的功效。现代医学研究表明，黄连具有抗菌、抗炎、抗肿瘤、抗糖尿病等作用，黄连碱是黄连主要活性成分之一[3]。目前关于黄连碱对软骨细胞增殖影响的研究报道较少。本研究采用体外软骨细胞共培养的方法，观察黄连碱对大鼠关节软骨细胞的增殖及转化生长因子β1的表达情况，初步探讨其治疗骨关节炎的可能作用机制。

    1 材料与方法

    1.1 动物与试剂

    本研究采用的清洁级Sprague Dawley(SD)大鼠购置于兰州军区乌鲁木齐总医院实验动物中心；DMEM培养基(赛业生物科技有限公司，广州，中国)；0.25%胰蛋白酶、0.2%Ⅱ型胶原酶、青链霉素混合液(Gibco ......