刘鹏年 李忆兰 张路 谢飞 李剑瑜 武凡

    慢性阻塞性肺疾病(chronic obstructive pulmonary disease，COPD)以持续气流受限为特征，是导致高致残率和高致死率的呼吸系统的慢性疾病之一，目前尚无有效的治疗方法。三七总皂甙是五加科人参属植物三七的主要有效的活性成分，其中以三七皂甙Rg1、Rb1及三七皂甙R1含量最高，目前对三七皂甙Rg1研究较多，但对Rb1知道甚少，而且机制尚不明确[1]。对三七皂甙Rb1的研究主要是探讨三七皂甙对自由基和细胞因子的影响，对其防护COPD线粒体的作用机理目前鲜见报导[2]。课题组用烟熏法复制大鼠COPD模型，从组织学、生物化学、生物物理学等方面多层次地研究三七皂甙单体Rb1对慢性阻塞性肺疾病大鼠线粒体的作用及作用机理，为开发三七单体Rb1在临床防护COPD的应用提供尽可能详尽的试验依据和理论基础。

    1 材料与方法

    1.1 主要试剂

    三七皂甙Rb1购自昆明植物研究所;呼吸链复合体Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ及ATP合酶试剂盒购自R＆D system公司;亲脂性阳离子荧光染料Rhodamine123购于 sigma 公司;1，6-二苯基-1，3，5 乙三稀(1，6-diphenyl-1，3，5-hexatriene，DPH)购自瑞典 Fluka 公司;分泌型磷脂酶A2(secretory phospholipase A2，sPLA2)试剂盒购自assay kit，R＆D system公司，采用全自动酶免分析仪测定，sPLA2活性的测定严格按照说明书进行。

    1.2 实验动物

    雄性Wistar大鼠40只，体质量(200±10)g，动物购自河北医科大学动物试验中心，合格证号:冀医动字号04056。

    1.3 动物模型复制

    参照文献[3]并加以改进，将40只大鼠随机分为4组，每组10只，Ⅰ组PBS灌胃作为对照组，Ⅱ组COPD模型制作:第1天和第14天向气管内滴入LPS各 1 g/L，2～13日和 15～42日在 80 cm×50 cm×40 cm密闭箱内香烟熏蒸0.5小时(烤烟型，焦油量14 mg，烟气烟碱量1.1 mg)，Ⅲ保护组在制模同时每日腹腔注射Rb1 10 mg/kg为Rb1组低剂量，Ⅳ保护组每日腹腔注射Rb1 20 mg/kg为Rb1组高剂量组，COPD模型组每日腹腔注射等剂量生理盐水。制模后处死各组大鼠，提取肺脏线粒体作呼吸链复合体活性、ATP合酶活性、线粒体膜电位、线粒体荧光偏振度及sPLA2活性测定 ......