单文超 冯会宾 赵琰 曾文浩 贺娜娜 赵妍 孙晔 屈会化

    ·论著·

    间接竞争酶联免疫分析法测定葛根中葛根素的含量

    单文超 冯会宾 赵琰 曾文浩 贺娜娜 赵妍 孙晔 屈会化

    目的 利用间接竞争酶联免疫分析法(indirect competitive enzyme linked immunosorbent assay,ic-ELISA)测定葛根中葛根素的含量。方法 利用抗葛根素单克隆抗体,通过线性关系、精密度、回收率的考察,建立葛根素的ic-ELISA分析方法。结果 该方法的线性范围为15.6～500 ng/mL,孔间差和板间差均不大于3.5%,平均回收率为101.8%,并且该法检测结果与高效液相色谱法检测结果一致。结论 本实验为葛根质量控制以及含葛根药材的中药复方中葛根素的含量测定提供了一种新技术方法。

    间接竞争酶联免疫分析法; 葛根素; 葛根; 含量测定

    葛根为豆科植物野葛Pueraria lobata(Willd.) Ohwi的干燥根[1],具有解肌退热、透发麻疹、生津止渴、升阳止泻的作用[2]。葛根素属于异黄酮类,是葛根的质量控制成分[1],已被广泛地应用于治疗临床多种疾病[3-5]。

    葛根素的含量测定主要采用高效液相色谱法(high performance liquid chromatography,HPLC)[6-8]。近年来,基于小分子单克隆抗体[9-14]建立的间接竞争酶联免疫分析法(indirect competitive enzyme linked immunosorbent assay,ic-ELISA)具有特异性强,灵敏度高,重复性好,简便快捷,前处理简单,经济无污染[15]等特点,特别适用于微量基质生物样品中小分子含量的分析。在ic-ELISA基础上建立的胶体金快速检测试纸可实现中药材的现场快检,更是引起了药品监管部门的关注。

    本研究利用实验室制备的抗葛根素单克隆抗体[16],建立了葛根素ic-ELISA法,准确测定了葛根中葛根素的含量,为微量基质生物样品中葛根素的含量分析及葛根素胶体金快速检测试纸的研究奠定了基础。

    1 材料与仪器

    葛根素对照品(中国食品药品检定研究院,含量96%,批号:110752-200912),不同批次(3批)葛根饮片均购于同仁堂药店。

    高效液相色谱仪(Agilent Technologies 1260 Infinity),甲醇(色谱纯,fisher),双蒸水(娃哈哈), ELISA分析及其他相关药品如磷酸盐和Tween-20等均为国产分析纯 ......