刘如秀 彭杰 刘宇

    病态窦房结综合征(sick sinus syndrome，SSS)是由于窦房结或其周围组织病变，导致冲动形成和传出障碍而产生的心律失常和一系列临床表现的综合征。通阳活血方是刘志明老中医临证70余年治疗SSS的经验方，临床疗效确切[1]。本实验采用酶标仪、流式细胞分析仪、激光共聚焦显微镜，观察通阳活血方含药血清对模拟缺血再灌注兔窦房结细胞凋亡和骨架蛋白形态结构的影响，探讨其对体外培养窦房结细胞的保护作用。

    1 材料与方法

    1.1 实验动物

    出生24小时内新西兰乳兔，雌雄不拘，由北京隆安实验动物养殖中心提供，批号:11401400000095。

    1.2 实验药物

    通阳活血方药物组成:附子6 g、红参10 g、当归12 g、黄芪 18 g、三七 3 g，经水煎醇提法制成含1 g/mL生药的无菌中药原液。含药血清制备方法:取成年新西兰大耳白兔40只(由北京隆安实验动物养殖中心提供，批号:11401400000095)，雌雄各半，用随机数字表法随机分为4组，每组10只，通阳活血方含药血清大剂量组按照每日生药量54.96 g/kg·体质量(相当于70 kg成人临床用药量12倍)、中剂量组按照每日生药量27.48 g/kg·体质量(相当于70kg成人临床用药量6倍)、小剂量组按照每日生药量13.74 g/kg·体重(相当于70 kg成人临床用药量3倍)，分别用蒸馏水配置成混悬液给兔灌胃，每天2次，连续7天;空白血清组给予等量正常饮用水。末次给药前禁食不禁水12小时，给药后2小时，耳中央动脉取血，自然分离血清，56℃水浴30分钟灭活处理，0.2μm微孔滤膜过滤除菌，分装为通阳活血方含药血清大、中、小剂量组和空白血清组，-20℃冷存备用。

    1.3 试剂

    DMEM/F12(1∶1)培养基(美国 Thermo公司产品，批号:NVJ0307);胎牛血清(美国Gibco公司产品，批号:911585);低糖DMEM培养基(美国Hyclone公司产品，批号:DM121501D);胰酶(美晨公司，批号:C1401130);PI-Annexin V-FITC凋亡检测试剂盒(北京大学医学部制剂室);一抗:Monoclonal Anti-Vinculin antibody(美国Sigma公司产品 ......