张国良 王玲玲 詹森林 曹廷智 汪文斐 张红梅 邓群益 聂广

    不同中医证型肺结核患者外周血CD14+单核细胞IL-1β、IL-1Ra表达水平的差异

    张国良王玲玲詹森林曹廷智汪文斐张红梅邓群益聂广

    目的探讨肺结核患者不同中医证型与CD14+单核细胞白介素-1β(interleukine-1β,IL-1β)、白介素-1受体拮抗剂(interleukine-1 receptor anlagenist,IL-1Ra)表达水平的相关性。 方法选取104例肺结核确诊患者为研究对象，其中肺阴亏虚33例，阴虚火旺36例，气阴两虚35例。采集抗凝血并利用密度梯度离心法分离外周血单个核细胞，与CD14+免疫磁珠孵育后获得单核细胞，使用结核杆菌裂解物刺激单核细胞，同时设立空白对照。12小时后收集细胞上清通过酶联免疫吸附法测定IL-1β、IL-1Ra水平，同时裂解细胞提取总RNA，利用实时定量PCR技术测定IL1B、IL1RN基因相对表达量。通过方差分析比较不同证型肺结核患者IL-1β、IL-1Ra表达水平的差异。结果(1)成功建立检测IL1B、IL1RN基因的实时定量PCR技术，靶基因可以被有效扩增，并且引物具有良好特异性;(2)结核菌刺激后IL-1β蛋白表达水平显著升高，其中肺阴亏虚组显著高于阴虚火旺组和气阴两虚组(P0.05)。同时，在mRNA层面气阴两虚组IL1RN表达水平显著高于其它两组，差异有统计学意义(P1 对象与方法

    1.1研究对象

    选取于2014年6月至2015年6月期间在深圳市第三人民医院就诊的104例肺结核患者为研究对象，其中男性65例，女性39例，平均年龄(36.5±13.7)岁。所有患者均符合2005年中华医学会《临床诊疗指南·结核病分册》中的诊断要求[5]，且痰涂片阳性，结核菌特异性IFN-γ Elispot检测阳性，均为初治肺结核，无合并其它感染性疾病、遗传代谢性疾病和自身免疫性疾病等。本研究经深圳市第三人民医院伦理委员会批准，所有研究对象均签署知情同意书。

    1.2试剂与仪器

    人淋巴细胞分离液(批号：DKW-KLSH-0100)购自深圳达科微生物公司，RPMI 1640培养基(批号：11875-093)、胎牛血清(fetal bovine serum，FBS，批号：10437-028)均购自美国Gibco公司，CD14免疫磁珠(货号130-097-052)购自德国Miltenyi公司，总RNA提取试剂盒(RNeasy Mini Kit，批号：74106)购买自德国Qiagen公司 ......