闫瑢玓 方慧 迟莉

    灯盏花乙素对肝星状细胞及TGF-β1/Smad信号通路的作用评价

    闫瑢玓 方慧 迟莉

    目的 观察灯盏花乙素(scutellarin)对肝星状细胞(hepatic stellate cell,HSC)及转化生长因子β1(TGF-β1)/Smad信号通路的影响,探讨scutellarin抗肝纤维化的机制。方法 建立TGF-β1诱导的HSC LX-2模型,CCK-8法检测scutellarin对细胞增殖的作用,化学发光法检测scutellarin对Caspase3/7活性的影响,酶联免疫吸附测定(enzyme linked immunosorbent assay, ELISA)法检测细胞上清液Ⅰ型前胶原的含量,ELISA法检测细胞Smad2和Smad3磷酸化水平。结果

    灯盏花乙素; 肝星状细胞; TGF-β1/Smad信号通路

    肝纤维化是指在各种致病因子作用下,肝星形细胞(hepatic Stellate cell,HSC)被活化并增殖,分泌出大量的胶原纤维,过度沉积于肝脏的病理过程,它不是一个独立的疾病,而是许多慢性肝脏疾病的共同阶段。肝纤维化属于可逆的阶段,肝纤维化阶段的治疗非常重要[1]。灯盏花乙素(scutellarin,scu)又名野黄芩苷,是从灯盏花中提取的一种黄酮类成分,具有广泛的生物学活性。近年来发现灯盏花乙素对多种器官纤维化[2-3]有治疗作用,可以减轻CCl4和猪血清诱导的肝纤维化大鼠模型的纤维化程度[4-5],但其抗肝纤维化的作用机制研究较少。转化生长因子β1 (transforming growth factor-β1,TGF-β1)是促进HSC增殖和胶原纤维分泌作用最强的细胞因子之一[6]。本研究拟在人肝星形细胞系LX-2细胞上观察灯盏花乙素对肝星形细胞生物学活性及TGF-β1信号通路的影响,初步探讨灯盏花乙素治疗肝纤维化的作用机制。

    1 材料和方法

    1.1 药品、试剂和器材

    灯盏花乙素,成都贝斯特试剂有限公司,纯度≥98%,批号:150615;LX-2细胞,Scott L. Friedman教授赠送[7];胎牛血清(fetal bovin serum, FBS),GIBCO公司,批号:1616496;DMEM高糖培养基,Hyclone,批号:NAC1363;Cell Counting Kit-8 (CCK-8)试剂盒,日本同仁化学研究所,批号: GX612;Caspase-Glo?3/7检测试剂盒,普洛麦格(北京)生物技术有限公司,批号:0000116968;转化生长因子β1,Peprotech Inc,批号:100-21;Procollagen Type I C-peptide(PIP)EIA试剂盒,Takara Bio Inc,批号:AK1801;PathScan?Phospho-Smad2 (Ser465/467)Sandwich ELISA Kit,Cell Signaling Technology,Inc,批号:0015;PathScan?Phospho-Smad3(Ser423/425)Sandwich ELISA Kit,Cell Signaling Technology,Inc,批号:0028 ......