刘慧 赵俊云 杨向竹 薛慧清 李彩彩 马鑫 张娜 周然

    黄芪糖蛋白对胶原诱导性关节炎小鼠Th17/Treg细胞免疫平衡的影响

    刘慧 赵俊云 杨向竹 薛慧清 李彩彩 马鑫 张娜 周然

    目的 研究16kD黄芪糖蛋白对胶原诱导性关节炎(collagen-induced arthritis，CIA)模型小鼠Th17/Treg细胞免疫平衡的影响，探讨黄芪糖蛋白治疗胶原诱导性关节炎小鼠的免疫作用机理。方法 采用雄性Balb/c小鼠建立牛Ⅱ型胶原诱导性关节炎小鼠模型，将造模成功的小鼠随机分为CIA模型组、氢化可的松阳性对照组、黄芪糖蛋白高、中、低剂量组，另设空白对照组；各治疗组腹腔注射药物14天，对照组与模型组注射等体积生理盐水。采用流式细胞术检测各组小鼠外周血CD3+CD4+IL-17A+Th17细胞、CD4+CD25+Foxp3+Treg细胞比例；Western blot法检测各组小鼠脾组织中维甲酸相关孤独受体γt(retinoid-related orphan receptor γt, RORγt)和叉头状转录因子3 (forkhead box protein 3,Foxp3)的蛋白表达水平。结果 流式检测结果显示,黄芪糖蛋白可显著降低模型组小鼠外周血中CD3+CD4+IL-17A+Th17细胞比例(P1 材料与方法

    1.1 实验动物

    Balb/c雄性小鼠，90只，体质量(18±2)g，清洁级，购于北京华阜康生物科技股份有限公司，许可证号：SCXK(京)2014-0004。

    1.2 主要药物、试剂、仪器

    AmGP为自制；弗氏完全佐剂，Sigma公司;胶原蛋白Ⅱ型(牛)，Chondrex公司；Anti-RORγt Purified、Anti-Foxp3 Purified，eBioscience公司；β-actin、HRP标记羊抗兔IgG、HRP标记羊抗小鼠IgG，北京博奥森生物技术有限公司；四甲基乙二胺，北京康为世纪生物科技有限公司；苯甲基磺酰氟、过硫酸铵、Tween-20、分离胶缓冲液、浓缩胶缓冲液、聚偏氟乙烯微孔转移膜、5%脱脂奶粉、Tris、SDS、BCA蛋白定量试剂盒，Solarbio公司;Mouse IL-17A PE-Cy7 Antibody、Mouse CD4 FITC Antibody、Anti-Mouse CD25 APC、Anti-Mouse Foxp3 PE、Cocktail(PMA+Ionomysin+BFA)，美国BioLegend公司。

    JY600C型电泳仪 ......