张小艺 郑宏 王永强 王蕾

    ·论著·

    梓醇外泌体对低血清培养致人神经母细胞瘤(SH-SY5Y)细胞损伤的保护作用

    张小艺 郑宏 王永强 王蕾

    目的 探讨梓醇外泌体对低血清培养致人神经母细胞瘤(SH-SY5Y)细胞损伤的保护作用。方法梓醇80 μmol/L预处理SH-SY5Y细胞72小时后，收集细胞上清液，聚合物沉淀法提取细胞上清液外泌体；乙酰胆碱酯酶法测定外泌体含量；将提取出的外泌体加入低血清培养的SH-SY5Y细胞中，24小时后，CCK-8法测定其细胞存活率。结果与空白对照组比较，梓醇给药组细胞外泌体分泌量明显增多(P1 材料与方法

    1.1 药物及试剂

    人胚胎来源的神经母细胞瘤细胞株(SH-SY5Y)细胞由北京脑重大疾病研究院王晓民教授惠赠。梓醇标准品(购于中国食品药品鉴定研究所，批号：110808-201210，纯度>98%)；RPMI 1640培养基(Corning公司)；胎牛血清、青霉素-链霉素和0.25%胰酶(Gibco公司)；CCK-8试剂盒(日本株式会社同仁化学研究所)；Exosome Isolation kit试剂盒(美国101Bio公司)；EXOCET试剂盒(美国SBI公司)。

    1.2 实验仪器

    正置相差显微镜(日本Nikon公司)；CO2培养箱(美国Thermo公司)；生物安全柜(新加坡艺思高科技有限公司)；台式离心机(上海安亭科学仪器厂)；酶标分析仪(美国Molecular Devices公司)；-80℃低温冰箱(美国Thermo公司)；4℃冰箱(中国海尔公司)；VG3S25型涡旋震荡器(IKA公司)；低温生物离心机(德国Eppendorf AG公司)；超速离心机(日本Hitachi Koki Co公司)。

    1.3 SH-SY5Y细胞培养

    细胞培养在RPMI 1640培养基中(含体积分数10% FBS、100 U/mL青霉素和100 μg/mL链霉素)，接种在75 cm2培养瓶中。在5% CO2、37℃培养箱中孵育。每4～5天传代一次。

    1.4 细胞计数试剂盒CCK-8测定SH-SY5Y细胞存活率

    取对数生长期的SH-SY5Y细胞，调其密度为3×105/mL，接种于96孔板中，每孔100 μL，并分别加入各组不含细胞的空白溶液。经过处理后，每孔加入10 μL CCK-8溶液，培养箱中孵育1.5～2小时。用酶标仪在450 nm波长检测各孔的吸光度值(optical density,OD)。细胞存活率=(实验组OD值-实验组空白溶液OD值)/(空白对照组OD值-空白对照组空白溶液OD值)×100% ......