武虹波 赵丕文 孙丽萍 蔡欣悦 赵笛 杨蕾 卢迪

    四物合剂干预顺铂作用卵巢颗粒细胞E2分泌水平的实验研究

    武虹波 赵丕文 孙丽萍 蔡欣悦 赵笛 杨蕾 卢迪

    目的 探讨四物合剂对顺铂损伤后颗粒细胞分泌E2水平的影响。 方法 取10只22～24天SD雌性大鼠卵巢颗粒细胞培养，另取48只22～24天SD雌鼠随机分为生理对照组、模型组、阳性组、四物合剂大、中、小剂量组，每组8只，以生理盐水(生理对照组与模型组，0.5 mL/天)，戊酸雌二醇片阳性组(0.4 mg/kg·d)，四物合剂大剂量组(13.5 mL/kg·d)、中剂量组(6.75 mL/kg·d)、小剂量组(3.38 mL/kg·d)分别灌胃3天后取药理血清。颗粒细胞用含20 %药理血清的细胞培养液分别培养24小时后检测指标。MTT法观察药理血清对顺铂损伤后原代颗粒细胞增殖的影响；放射免疫法观测四物合剂药理血清对顺铂作用颗粒细胞E2分泌的干预效果；免疫组化法检测四物合剂药理血清对顺铂作用颗粒细胞CYP19a1基因表达和Smad2/3激活的干预效果。 结果 MTT法检测结果表明：与模型组相比，阳性组、四物合剂各剂量组细胞吸光度均增强，四物合剂大剂量数值最高(P1 材料与方法

    1.1 实验动物

    健康雌性22～24天SD大鼠，体质量75～80 g，清洁级，检疫合格，购自斯贝福(北京)实验动物科技有限公司。许可证号：SCXK(京) 2011-0004。

    1.2 药物、试剂与仪器

    DMEM F-12培养液(批号：SH-30023，Hyclone公司)、DAB显色试剂(批号：ZLI-9018，中杉金桥)，免疫组化试剂盒(批号：SP-9001，中杉金桥)，DMSO(批号：DB370，Amresco)。Smad2/3(批号：sc-8332，Santa)，Psmad2/3(批号：sc-11769，Santa)，CYP19a1(批号：sc-30086，Santa)，二抗：山羊抗兔IgG(批号：ZB2301)、山羊抗小鼠IgG(批号：ZB2305)由中杉金桥公司生产。

    顺铂粉针剂(CDDP，济南齐鲁制药，10 mg/支，批号：H37021358)，注射时使用生理盐水将其配制浓度为2.5 μg/mL稀释液；四物合剂(吉泰安药业有限公司，100 mL/瓶)；补佳乐(拜耳医药有限公司生产，1 mg/片，批号：B01007102)。

    CO2培养箱(SANYO，MCO-18AIC)；超净工作台(北京亚泰隆实验技术中心，022-2522) ；低温离心机 (SIGMA ......