冯娅茹 赵崇军 倪媛媛 田敬欢 夏青 张文婷 樊娇娇 马志强 林瑞超

    ·论著·

    香加皮对斑马鱼发育毒性及心脏毒性的影响

    冯娅茹 赵崇军 倪媛媛 田敬欢 夏青 张文婷 樊娇娇 马志强 林瑞超

    目的 探讨香加皮水提液对斑马鱼的发育毒性及不同暴露时间药物对心脏毒性的影响。方法 参照经济合作与发展组织推荐的方法，将受精后6小时(6 hour-post-fertilization，6 hpf)胚胎暴露在含有不同浓度香加皮水溶液的24孔板中，分别在24、48、72、96 hpf阶段测定胚胎/幼鱼的自主抽动次数、心率、孵化率、死亡率等指标。随后，使用不同浓度的香加皮水溶液处理发育至48、72、96 hpf的斑马鱼24小时，通过死亡率确定不同暴露阶段对斑马鱼心脏毒性的影响。结果 各暴露组24 hpf自主抽动次数增加、48 hpf心率以及72 hpf孵化率显著降低，与正常对照组相比均有显著性差异(P1 材料与方法

    1.1 实验动物

    斑马鱼(AB-type)由本实验室循环养殖系统饲养提供，循环养殖水根据Brand等[6-7]的方法配制。水温控制在(28±0.5)℃，pH值7.0～7.2，电导率450～550 μS/cm，光照/黑暗周期为14小时/10小时。成年斑马鱼每日喂食3次人工孵化的丰年虫幼体。实验前一晚暗周期开始之前，将成年雌雄斑马鱼按1∶2或1∶1配对，放入带隔板的产卵盒中，第2天早晨给予光照，抽掉隔板。产卵完成后，缓缓晃动产卵盒，以便让鱼卵更好地受精，随后用吸管将鱼卵收集于含有孵化水的干净无菌培养皿中，用培养液清洗鱼卵数次以除去未受精卵、粪便等杂物，将发育完整受精卵放于生化培养箱中培养。

    1.2 仪器与材料

    香加皮为安国圣山药业有限公司提供，经北京中医药大学刘春生教授鉴定为萝藦科植物杠柳PeriplocasepiumPunge的干燥成熟种子，斑马鱼循环水养殖系统(北京爱生科技公司)；TE-2000-S光学倒置显微镜(NIKON)；NaCl、KCl、Na2HPO4、K2HPO4、MgSO4、NaHCO3、CaCl2，(分析纯，北京化工)；1 mL，5 mL移液器(eppendorf)；胰蛋白酶(Protease from Streptomyces griseus,sigma,P6911)；恒温培养箱LRH-250Z(广州瑞明仪器有限公司)；真空干燥箱DZF-6050B(上海一恒科学仪器有限公司)；旋蒸仪R-1001-VN(郑州长城科工贸有限公司)。

    1.3 香加皮样品制备 ......