樊娇娇 李发荣 赵崇军 徐柯心 杨冉 乔艺涵 倪媛媛 王雨彤 马志强 林瑞超

    盐酸肾上腺素诱导建立斑马鱼血栓模型的优化与适用性研究

    樊娇娇 李发荣 赵崇军 徐柯心 杨冉 乔艺涵 倪媛媛 王雨彤 马志强 林瑞超

    目的 优化盐酸肾上腺素诱导建立斑马鱼血栓模型的条件，并考察此模型在中药抗血栓活性筛选中的适用性。方法 应用正交实验，以斑马鱼尾静脉红细胞的染色强度为定量指标，考察盐酸肾上腺素诱导建立斑马鱼血栓模型的最佳条件。利用该模型，对临床常用的11味中药的抗血栓活性进行筛选，探讨该模型在中药抗血栓活性筛选中的适用性与可靠性。结果 盐酸肾上腺素诱导建立斑马鱼血栓模型的最佳条件为：受精后3天(3 dayspost fertilization，3dpf)的斑马鱼在浓度为15 μmol/L盐酸肾上腺素溶液中暴露16小时。9味活血化瘀中药川芎、郁金、延胡索、丹参、红花、虎杖、三棱、莪术、水蛭在斑马鱼血栓模型中表现出显著的预防和治疗血栓作用，而甘草和党参两味中药在斑马鱼血栓模型中未表现出预防和治疗血栓的作用。结论 盐酸肾上腺素诱导建立的斑马鱼血栓模型在中药抗血栓活性的筛选与疗效评估中具有良好的适用性。

    盐酸肾上腺素； 斑马鱼血栓模型； 定量； 抗血栓活性； 药物筛选

    Correspondinganthor：LINRuichao,E-mail:linrch307@sina.com

    血栓形成是导致心脑血管疾病的重要因素，此类疾病严重威胁人类健康，据世界卫生组织统计数据显示，全世界每年约有2300万人死于血栓性疾病[1]。活血化瘀中药具有良好的抗血栓活性，从中药中筛选出较好的抗血栓物质，进行药物研发，已引起国内的普遍重视。目前抗血栓药物的筛选主要采用体外凝血实验和传统的啮齿类动物在体血栓模型，前者只能针对其中部分靶点[2]，难以模拟体内血栓发生的真实情况；后者在进行活性筛选时，操作复杂、周期长、费用高，尚不适用于抗血栓药物的大规模筛选[3]。因此，开发出操作便捷、准确、高通量，并与临床病理生理机制相似的的血栓模型具有重大的意义[4]。

    斑马鱼作为一种新的动物模型，与人类基因相似度高达87%，且繁殖能力强，发育周期短，养殖成本低，并且早期幼鱼透明，可在显微镜下直接观察斑马鱼的血液流动情况[5]，已广泛应用于药物毒性和活性方面的研究。本课题组利用盐酸肾上腺素成功建立了斑马鱼血栓模型，此模型既能克服体外凝血实验的弊端，又能实现高通量筛选。本研究应用正交试验，以斑马鱼尾静脉红细胞染色强度为定量指标，优化盐酸肾上腺素诱导建立斑马鱼血栓模型的建模条件 ......