唐瑶 包晓霞 鲁周南 薛晓鸥

    ·论著·

    “连花汤”正丁醇提物对子宫内膜癌细胞增殖和凋亡的影响

    唐瑶 包晓霞 鲁周南 薛晓鸥

    目的 研究“连花汤”正丁醇提物对子宫内膜癌细胞增殖和凋亡的影响，为临床应用“连花汤”治疗子宫内膜癌提供实验依据。方法 提取物从10 mg/mL依次降浓度梯度至0.078125 mg/mL分成8组，即：10 mg/mL、5 mg/mL、2.5 mg/mL、1.25 mg/mL、0.625 mg/mL、0.3125 mg/mL、0.15625 mg/mL、0.078125 mg/mL组。MTT法检测细胞抑制率；分别计算出两种细胞的半数抑制浓度(IC50)，流式细胞术检测细胞凋亡率。结果 “连花汤”正丁醇提物在不同浓度、不同时间里对2种内膜癌细胞系的增殖有显著抑制作用。其中，作用24小时、48小时，HEC-1A细胞1.25 mg、0.625 mg、0.3125 mg组间细胞抑制率有显著性差异(P1 材料和方法

    1.1 细胞株

    人子宫内膜癌细胞株Ishikawa细胞及HEC-1A细胞由北京大学人民医院妇科实验室友情赠送。

    1.2 药物与试剂

    “连花汤”正丁醇提取物制备：中药复方“连花汤”：黄连10 g、白花蛇舌草15 g、半枝莲15 g、生黄芪20 g，5剂，采购自东直门医院中草药房，于北京大学天然药物及仿生药物国家重点实验药室以正丁醇萃取，烘箱烘干，密封，冰箱4摄氏度保存。胎牛血清购自Gibco，DMEM 购自Hyclone，MTS试剂购自Promega，凋亡试剂购自BD公司。

    1.3 仪器设备

    CO2细胞培养箱、酶联免疫检测仪(美国Thermo Scientific公司)，垂直超净工作台(Esco公司)，节能型智能恒温槽(宁波新芝生物科技有限公司)，倒置荧光显微镜(北京锐驰恒业仪器科技有限公司)、流式细胞仪(Epics Elite ESP型，美国Coulter公司)。

    1.4 方法

    1.4.1 MTS法检测子宫内膜癌细胞的增殖情况及计算IC50值 将Ishikawa及HEC-1A于含10%胎牛血清的DMEM培养液中培养，培养条件在5%CO2、37℃及饱和湿度下进行，以1×104cells/well接种于96孔板中，常规培养24小时，待细胞贴壁后，将“连花汤”正丁醇提取物溶解在含0.1%DMSO的培养液中，配成20 mg/mL的母液，于实验当天用DMEM培养液稀释。MTT检测子宫内膜癌细胞的增殖情况，被试药物被稀释为8个浓度梯度 ......