李希 万溪 高晶晶 赵层闪 刘学飞 杨丽静 徐丽娟 田军彪

    化浊解毒活血通络方对脑缺血再灌注损伤大鼠ZO-1和occludin表达的影响

    李希 万溪 高晶晶 赵层闪 刘学飞 杨丽静 徐丽娟 田军彪

    目的 观察化浊解毒活血通络方对脑缺血再灌注损伤模型大鼠紧密连接蛋白ZO-1和occludin表达的影响，探讨其神经保护机制。方法 以改进后的Zea-Longa线栓法制备局部梗死性脑缺血再灌注损伤模型，以Longa评分法进行神经功能缺损评分，光镜下观察脑组织形态改变，免疫组化法观察ZO-1和occludin的分布及表达，RT-PCR法评测其在各组大鼠缺血侧脑组织中表达量。结果 免疫组化结果显示，与假手术组相比，模型组ZO-1表达水平明显降低(P0.05)。RT-PCR法显示：与假手术组相比，模型组ZO-1及occludin表达水平明显降低(P1 材料与方法

    1.1 试剂及仪器

    ZO-1抗体(Invitrogen)、occludin抗体(Invitrogen)、NT膜(Pall Corporation)，免疫组化试剂盒抗兔、抗小鼠(VECTOR LABORATORIES，INC.)，总RNA提取试剂、cDNA合成试剂盒、PCR反应体系、DNA标准均由Takara公司提供，PCR基因扩增仪(PE-9600)，紫外可见分光光度计(756MC)，复日生物电泳图像分析系统(FR-980)，离心机(TDL-5-A)。

    1.2 实验动物及分组

    成年SD大鼠，4～5个月龄，雄性，清洁级，共54只，体重(250～300) g，购置于河北医科大学实验动物中心(合格证编号：1407012)，随机分为：假手术组、模型组、尼莫地平组、中药高剂量组、中药中剂量组、中药低剂量组，每组9只。

    1.3 药物

    化浊解毒通络方组成：石菖蒲15 g、地龙15 g、茯苓15 g、泽泻6 g、黄连6 g、川芎9 g、丹参15 g、赤芍15 g、当归9 g、郁金15 g，颗粒配方；尼莫地平片(拜尔医药保健有限公司，规格30 mg，批号BJ27586)，均购于河北省中医院药房。

    1.4 模型制备及干预方法

    以改进后的Zea-Longa线栓法阻断大鼠右侧大脑中动脉制造局部梗死性脑缺血再灌注损伤模型。选用直径为0.26 mm的尼龙线，剪成长度约50 mm的线段，将头端烧灼成直径为0.27～0.28 mm的圆滑小球，距离小球18 mm处以黑色笔标记。用酒精完全消毒后将线栓置于放有肝素钠的试管中备用 ......