王晓燕 常时新 李冠武 何静 王乐 宋彦颖 缪宇

    青娥丸对去卵巢大鼠骨质疏松骨微循环的作用机制研究

    王晓燕 常时新 李冠武 何静 王乐 宋彦颖 缪宇

    目的 通过观察青娥丸对卵巢切除骨质疏松大鼠骨髓灌注及血管内皮生长因子的影响，探讨经典方剂青娥丸对绝经后骨质疏松骨微循环的作用机制。 方法 将6月龄SD雌性大鼠60只随机分为4组，即假手术组(SHAM组)、去势对照组(OVX组)、青娥丸组(QEW组)和雌激素组(E2组)。建模8周后，分别进行药物干预3个月，检测各组大鼠股骨远端、中端、近端的骨髓灌注参数以及血管内皮标志物血小板-内皮细胞黏附分子(platelet endothelial cell adhesion molecule-1，CD31)、血管内皮生长因子(vascular endothelium growth factor，VEGF)表达情况。 结果 骨髓灌注参数：(1)股骨远端：治疗后OVX组容积转移常量(Ktrans)、速率常数(Kep)、渗漏空间(Ve)水平较治疗前均有明显降低(P1 材料与方法

    1.1 实验动物

    清洁级雌性SD大鼠60只，体重(350±15) g，购置于上海斯莱克实验动物有限公司，饲养于上海中医药大学附属岳阳中西医结合医院动物实验中心，合格证号：SYXK(沪)2006-0001。饲养观察室温度：(21±2)℃，相对湿度：45%～55%，给予标准光照周期。

    1.2 实验药品

    青娥丸由杜仲(盐炒)480 g、补骨脂(盐炒)240 g、核桃仁(炒)150 g、大蒜120 g制成大蜜丸(9 g/丸)，购自上海雷允上封浜制药有限公司，批号：Z31020467；针剂β-雌二醇(β-Estradiol，≥98%)，购自 Sigma公司，批号：E8875。

    1.3 主要试剂与仪器

    EDTA(pH 9.0) 抗原修复液(武汉谷歌生物科技有限公司，G1203)、BSA(Solarbio，A8020)、正常兔血清(Boster，AR1010)、二抗：HRP-山羊抗兔二抗(谷歌生物，GB23303)、一抗(VEGF)(abcam，ab1316)、二抗：HRP-山羊抗小鼠二抗(谷歌生物，GB23301)、一抗(CD31)(谷歌生物，GB13063)、二抗：HRP-兔抗山羊二抗(谷歌生物，GB23204)、组化试剂盒DAB显色剂(DAKO，K5007)、RIPA组织细胞快速裂解液(上海基尔顿生物，BYL40825)、BCA蛋白定量试剂盒(thermo，PICPI23223)、SYBRGreen PCR试剂盒(Invitrogen)、逆转录试剂盒(Invitrogen)等 ......