刘艺 王瑞昕 游龙泰 董晓旭

    斑马鱼与人类基因同源性高达85%，拥有广泛的细胞色素P450酶参与代谢反应，包括氧化、羟基化、接合、去甲基化和甲基化[1-3]，能体现Ⅰ相、Ⅱ相、肠菌及多途径代谢的综合结果。另具有饲养成本低、体外受精、透明易观察、单次产卵数较高等特点[4-5]。目前斑马鱼已被美国国家卫生研究院列为继人和鼠之后的第三大模式生物，可以快速筛选药物和定量评价待测化合物的肝毒性作用。

    大黄为蓼科植物掌叶大黄RheumpalmatumL.、唐古特大黄RheumtanguticumMaxim.ex Balf.或药用大黄RheumoffcihaleBaill.的干燥根和根茎，具有泻热通肠、凉血解毒、逐瘀通经的功效[6-7]。然而, 近年有报道大黄中成分对机体的肝功能有不良影响，长期应用可能引起肝损伤，推测芦荟大黄素可能为肝毒性成分之一[8-10]。另有研究表明芦荟大黄素能明显诱导动物肝细胞发生DNA损伤[11]，但芦荟大黄素的体内致肝毒性作用机制尚未明确。因此，本研究中利用斑马鱼独特的生理结构优势，通过观察不同浓度芦荟大黄素处理后斑马鱼生存率，确定10%致死浓度(10% lethal concentration，LC10)与最大非致死浓度(maximum non-lethal concentration，MNLC)；进而研究斑马鱼肝脏形态、肝脏不透光度平均值，卵黄囊吸收延迟面积的影响。最后，对斑马鱼CYP450酶，凋亡相关蛋白等进行检测，探讨芦荟大黄素致肝毒性的作用机制。

    1 材料与方法

    1.1 实验动物

    野生型AB品系斑马鱼，以自然成对交配繁殖方式进行。以上斑马鱼均饲养于28 ℃的养鱼用水中(水质：每1 L反渗透水中加入200 mg速溶海盐，电导率为480～510 μS/cm；pH为6.9～7.2；硬度为53.7～71.6 mg/L CaCO3)。饲养管理符合国际实验室动物护理评估和认证协会(AAALAC)认证的要求。

    1.2 实验用药、试剂与仪器

    芦荟大黄素购自上海诗丹德生物技术有限公司(批号：111573 ......