郑智礼 史兴华 于瀚 张亿 高艺宁 魏伟莉 邓秀兰

    “见肝之病，知肝传脾，当先实脾”为仲景“治未病”的代表性原文。研究表明，实脾治肝常取得事半功倍的疗效，但现有研究多集中在肝脾同病、同调状态下的机制研究，而遵循《金匮要略》原旨，着眼于“当先实脾”之“先”，探讨其客观性的相关报道乏陈。基于此，本课题采用肝郁叠加慢性肝损伤大鼠模型，通过不同的分组及给药方式，复制“当先实脾”的治疗方案。从肝功能生化指标、肝组织病理学的观察结果评价模型及药效；从5h-尿木糖排泄率的检测结果探讨“知肝传脾”的客观性；通过对比正常组、模型组及各干预组上述指标的变化，寻求 “当先实脾”的生物学依据，通过检测肝凋亡指数(apoptotic index，AI)、肝组织B细胞淋巴瘤-2(B-cell lymphoma-2，Bcl-2)及Bcl-2相关X蛋白(Bcl-2-associated X protein，Bax)的表达，观察“当先实脾”对肝细胞凋亡的影响，为丰富和发展中医药防治肝病做出有益的科学探索。

    1 材料与方法

    1.1 实验动物

    健康SD大鼠48只，雄性，体重(180±20)g，合格证号：SCXK(京)2016-0002，由斯贝福(北京)生物技术有限公司提供。饲于室温(25±0.5)℃，相对湿度(55±5)%，采用 12小时明暗交替光照，自由摄食饮水。

    1.2 实验药物及配置

    阳性药：双环醇200 mg/kg[2-3]；柴芍六君子汤方：柴胡12 g、白芍15 g、党参15 g、茯苓10 g、炙甘草5 g、白术10 g、法半夏10 g、陈皮10 g、枳壳10 g、焦三仙各10 g；四逆散方：柴胡12 g、白芍15 g、枳壳10 g、炙甘草5 g；六君子汤方：党参15 g、茯苓10 g、炙甘草5 g、白术10 g、法半夏10 g、陈皮10 g、焦三仙各10 g。

    实验用药均购自北京同仁堂医药药材有限公司，经北京中医药大学药用植物教研室鉴定，生药剂量比例按原著换算。各组药物常规煎煮3次，将3次滤液混合，将所得药液纱布过滤，水浴加热蒸发浓缩后贮于冰箱中备用。

    1.3 实验仪器与试剂

    全自动生化分析仪(CX4Pro,BECKMANCOULTER,USA)；光学显微镜(BX53,OLYMPUS,JAPAN)；全波长酶标仪(MultiskanGO,Thermo,USA)；荧光定量PCR仪(ABI,Steponeplus)；超微量分光光度计(Thermo,NanoDrop2000) ......