周晓荣 孟霜 冯振宇 史敏 赵建平

    马钱子又名番木鳖是马钱子科植物马钱(Strychnosnux-vomica.L)的干燥成熟种子，苦，温；有大毒，归肝、脾经，能够通络止痛、散结消肿，用于跌打损伤、骨折肿痛、风湿顽痹、麻木瘫痪、痈疽疮毒、咽喉肿痛[1]。研究发现，马钱子中的主要成分为生物碱类，其数量至少有20余种，其中士的宁和马钱子碱是其主要成分，具有确切的抗肿瘤作用[2]。除马钱子碱和士的宁外，还包括伪士的宁、伊卡金、异马钱子碱、伪马钱子碱、奴弗新和异士的宁等生物碱成分[3]。本课题通过前期实验提取分离出10种生物碱成分，并对人结肠癌HT-29细胞进行活性筛选，结果显示伪士的宁对HT-29细胞增殖有显著影响。本实验以伪士的宁为实验对象，通过MTT法进一步考察其对人结肠癌HT-29细胞是否具有时间依赖和剂量依赖关系，并利用流式细胞术检测其对人结肠癌HT-29细胞周期的影响，为后期研究其抗结肠癌机制提供依据。

    1 材料与方法

    1.1 药物与试剂

    伪士的宁(为本课题组前期提取分离纯化后，经质谱、氢谱和碳谱等波谱技术鉴定，纯度≥98%)；MC5A培养基(Gibco公司，批号为16600-082)；噻唑蓝(美国 Sigma公司)；胎牛血清(Gibco公司，批号为10099-141)；胰蛋白酶(Gibo公司，批号为15050065)；青霉素-链霉素双抗(Procell公司，批号为PB180120)；磷酸盐缓冲液(Procell公司，批号为PB180327)；细胞周期检测试剂盒(南京凯基生物，批号为KGA512)。

    1.2 细胞株

    人结肠癌HT-29细胞(武汉普诺赛生命科技有限公司，批号：CL-0118)

    1.3 仪器

    SW-CJ-1FD型超净工作台(苏州集团安泰空气技术有限公司)；MCO-15AC型CO2恒温培养箱(台湾SANYO公司)；IX51型倒置显微镜(日本OLYMPUS公司)；5702R型低速离心机(德国Eppendorf公司)；MULTISKAN MK3型酶标仪(美国Thermo公司)；CytoFLEX型流式细胞仪(美国BECKMAN COULTER公司) ......