赵霞 赵崇军 魏紫樱 韩志伟 邹迪新 林瑞超

    马钱子在历代应用中发挥着重要的作用，有效亦有毒，马钱子中毒事件时有发生，严重限制了其临床应用[1-2]。马钱子归肝经，有文章报道长期服用可导致肝肾功能异常。因此本试验主要利用斑马鱼模型研究马钱子肝毒性机制[3-4]。在前期研究中，主要是利用斑马鱼的肝脏表型对由马钱子的肝脏毒性进行了定性评价[5]，本研究的目的是利用斑马鱼肝脏形态、肝功能、生理参数及肝脏毒性相关基因的表达水平来定量评价马钱子对斑马鱼肝脏的影响。这是首次对斑马鱼中马钱子诱导的肝毒性进行初步、系统的研究，可为马钱子的肝毒性机制提供有价值的见解。

    1 材料与方法

    1.1 试剂和仪器

    动物：AB系斑马鱼，购自中国斑马鱼资源中心(武汉)，饲养于本实验室循环养殖系统。

    仪器：蔡司体视荧光显微镜(Zeiss Axio Zoom V16)，LRH-250Z型恒温生化培养箱(广州沪瑞明仪器有限公司)，RJLDL-50G型离心机(无锡瑞江分析仪器有限公司)，微型漩涡混悬(WH-90A，上海振荣科学仪器有限公司)，灭菌锅(MLS-3751L，日本panasonic公司)，Epoch 酶标仪(美国伯腾仪器有限公司)，UV-2000紫外-可见分光光度计(尤尼柯上海仪器有限公司)，HQ10-20H超纯水仪(长沙聚丰环保科技有限公司)，真空旋转蒸发仪(北京东方科技发展有限公司)，凝胶电泳(NanoDrop 2000)，CFX96 Touch Systems (bio-rad, USA)，TransStart Top Green qPCR Super Mix (TransGen Biotech)。

    材料：马钱子(编号#160611)由安国圣山药业有限公司提供。油红O(s19039-100g)，吖啶橙(s47568-5g)，4%多聚甲醛(p1110)购置于北京拜尔迪生物技术有限公司。SOD试剂盒(A001-3)、CAT试剂盒(A007-1)、AST试剂盒(C010-2)、ALT试剂盒(C009-2)、MDA试剂盒(A003-4)均购置于南京建成生物工程研究所，Bradford蛋白定量试剂盒(W042)(北京拜尔迪生物技术有限公司)。PBS缓冲液(21-040-CVR)(Corning，美国)。M3-氨基苯甲酰胺麻醉(MESAB-22)购置于美国密苏里州圣路易斯西格玛奥德里奇公司。H2O2购于北京化工厂，甲酰胺，SSC缓冲液(pH=7.0)购于北京生物技术有限公司。1，2-丙二醇溶液(中国广东西龙科学有限公司) ......