罗宇婷 莫岩君 吕桃桃 沈熠 邵帅 张羽墨 于天源

    推拿作为中医治疗周围神经损伤的常用方法，临床疗效好，不良反应小。大量研究证明，以三法三穴为代表的推拿手法可以有效促进SNI大鼠受损神经及后肢肌力的恢复。cAMP-PKA信号通路作为目前研究最深入的信号通路之一，在周围神经损伤过程中发挥了重要作用，尤其是在促进轴突及髓鞘再生、调节生长锥、促进NGF表达等方面。在以三法三穴为代表的推拿手法恢复周围神经损伤的起效机制中，是否有cAMP及PKA的参与，是探究推拿治疗周围神经神经损伤机理的重要环节。本研究观察“三法三穴”推拿治疗对坐骨神经损伤(sciatic nerve injury，SNI)大鼠背根神经节内cAMP及PKA表达的影响。

    1 材料与方法

    1.1 实验动物

    选用SPF级雄性Sprague-Dawley大鼠32只，体质量(200±10)g，购自北京斯贝福实验动物技术有限公司，许可证号：SCXK(京)2016-0011。购入后适应性饲养1周。所有实验程序均符合动物福利与伦理原则，并经北京中医药大学动物使用和管理委员会批准。

    1.2 药物与试剂

    2 mg/mL BSA标准品(索莱宝，PC0001)；彩虹245广谱蛋白Marker(12条带)(索莱宝，PR1920)；水合氯醛(沪试公司)；BCA蛋白定量试剂盒(索莱宝，PC0020)；10×TBST pH 8.0(索莱宝，T1081)、兔源cAMP抗体(Abcam公司，英国,ab76238)、兔源PKA抗体(Abcam Company，英国，ab32390)。

    1.3 主要实验仪器

    按摩推拿手法模拟仪(中华人民共和国发明专利号200710187403.1)；电泳仪(美国BIO-RAD公司，美国，10002468)；Mini-P-2电泳槽(BIO-RAD公司，美国，10007296)；MultiSkan3酶标仪(美国Thermo公司，1410101)；水平脱色摇床(六一公司，WD-9405FN)； Fresco低温冷冻离心机(Thermo公司，美国，75007406)；电动组织匀浆器(Fluka公司，美国)。

    1.4 造模与干预方法

    1.4.1 造模方法 用随机数字表法将大鼠分为正常组16只、假手术组16只、模型组16只、推拿组8只。先将大鼠用10%水合氯醛以0.35 mL/100 g体重的剂量腹腔注射麻醉；然后俯卧位固定于消毒过的鼠板上，手术区(右侧臀股交界处)备皮、常规消毒 ......