顾念念 索亚然 乔艺涵 王昭懿 冯丹 赵霞 孟雪丹 吴怡青 李朝峰 赵崇军 马志强 林瑞超 邹迪新

    水蛭药材为水蛭科动物水蛭HirudonipponicaWhitman、蚂蟥WhitmaniapigraWhitman或柳叶蚂蟥WhitmaniaacranulataWhitman的干燥全体，具有破血通经，逐瘀消癥的功效[1]。现代药理学研究表明，水蛭具有抗血栓、抗凝血、抑制肿瘤血管生成、抗癌转移及抗炎抗菌等活性，主要有效成分为蛋白质、多肽、氨基酸及一些小分子化合物[2-3]。目前有关水蛭药材的氨基酸测定报道较多，而用相似度结合模式识别的数据分析对水蛭药材进行质量评价较少。PITC衍生剂是目前广泛使用的HPLC氨基酸分析方法，该方法方便、快速，生成的苯氨基硫甲酰衍生物单一、稳定；紫外检测(254 nm)灵敏度高，可达1 pmol，本实验采用PITC柱前衍生法建立了水蛭药材的HPLC游离氨基酸指纹图谱和含量测定的研究方法，综合指纹图谱信息、聚类分析及主成分分析将药材分为3类，结果表明该方法可为水蛭药材质量控制评价提供参考。

    1 材料与方法

    1.1 仪器

    高效液相色谱仪(Waters 2695)包括2695四元梯度泵、自动进样器、2489紫外检测器、在线脱气机、柱温箱、Empower色谱工作站。FW-200型高速万能粉碎机(北京科伟永兴仪器有限公司)； KQ-3200B型数控超声仪(江苏昆山市超声仪器有限公司)；N-1300型旋转蒸发仪(上海爱朗仪器有限公司)；电子分析天平(Mettler Toledo 公司)；10-2AB型电热鼓风干燥箱(天津泰斯特仪器有限公司)；GTR10-2型高速冷冻离心机(北京时代北利离心机有限公司)；雷磁pH计(上海仪电科学仪器有限公司)。

    1.2 药材样品与试药

    水蛭药材共18批，经北京中医药大学鉴定系杨瑶君老师鉴定为水蛭科动物蚂蟥WhitmaniapigraWhitman的干燥全体，药材信息见表1。对照品(上海源叶生物科技有限公司)天门冬氨酸Asp(批号B21934)、谷氨酸Glu(批号B21916)、丝氨酸Ser(批号B21932)、甘氨酸Gly(批号B21915)、组氨酸His(批号B21938)、精氨酸Arg(批号B21920)、苏氨酸Thr(批号B21933)、丙氨酸Ala(批号B21911)、脯氨酸Pro(批号B21914)、酪氨酸Tyr(批号B21924)、缬氨酸Val(批号B21936)、蛋氨酸Met(批号B21913)、异亮氨酸Ile(批号B21937)、亮氨酸Leu(批号B21925)、苯丙氨酸Phe(批号B21910)、赖氨酸Lys(批号B21922) ......