崔方强 高彦彬 王悦芬 孟元 蔡朕 刘志强 江心灿 赵文景

    随着糖尿病发病率的逐年升高,糖尿病肾病(diabetic nephropathy,DN)已经成为导致终末期肾病的主要原因[1-2]。肾小球细胞外基质增生是DN典型的病理改变,能够引起蛋白尿的产生及疾病的进展[3]。但是DN肾小球细胞外基质增生的病理基质目前并不清楚,因此缺少相应的治疗措施。研究证实,足细胞上皮间质转分化在DN肾小球细胞外基质增生过程中起着重要作用[4]。足细胞上皮间质转分化(epithelial-mesenchymal transition,EMT)不仅可以引起蛋白尿,也可以导致肾小球Collagen I及FN蛋白累积,介导肾小球细胞外基质增生及肾小球硬化[5]。因此抑制足细胞EMT是DN防治研究的热点。糖肾宁广泛应用于临床防治DN,并且临床试验已经证实其具有确切的临床疗效[6],本实验旨在探讨糖肾宁对于KK-Ay小鼠肾小球细胞外基质增生及足细胞EMT的影响。

    1 材料与方法

    1.1 实验动物

    8周龄雄性KK-Ay小鼠及8周龄雄性C57BL/6J小鼠全部购自全部购自北京华阜康生物科技股份有限公司,实验动物许可证号：SCXK(京)2014-0004。

    1.2 实验试剂及药物

    Collagen I抗体(ab34710,abcam,英国),FN抗体(ab2413,abcam,英国),P-cadherin抗体(ab6528,abcam,英国),FSP-1抗体(ab27957,abcam,英国),肌酐测定试剂盒(批号：657881,ROCHE,瑞士),尿素氮测定试剂盒(批号：658513,ROCHE,瑞士),糖肾宁浸膏粉(配比：黄芪4份、葛根2份、川芎2份、大黄1份、金樱子2份、倒扣草3份,由首都医科大学中医药学院制剂室制备),缬沙坦胶囊(北京诺华制药有限公司,批号：X1440)。

    1.3 实验仪器

    离心机(Sigma,3K18),倒置显微镜(德国Leica公司)；凝胶化学发光成像分析系统(FUSION FX6 XT,Vilber公司)；高电流电泳仪电源(美国伯乐公司)；酶标仪(北京市新风机电技术公司,ZS-3)。

    1.4 实验方法

    1.4.1 动物模型建立及分组给药 KK-Ay小鼠给予高脂饲料喂养,C57BL/6J小鼠给予普通饲料喂养,喂养期间小鼠自由进食及饮水,4周后检测血糖及24小时尿蛋白定量 ......