刘奕 陈晓峰 刘逸 蔡东岭

    腰痛,作为临床常见病、多发病之一,据资料显示,约80%人群存在不同程度腰腿疼痛症状,可影响患者日常生活及工作,对患者生活质量造成严重影响[1]；其病理改变的前提及基础为腰椎间盘退变。腰椎间盘退变,引起脊柱生物力学改变,随着细胞外基质降解和椎间盘高度降低,髓核突出对脊神经根或脊髓进行压迫,最终导致神经不可逆损伤[2]。P38丝裂原活化蛋白激酶(p38 mitogen-activated protein kinase,P38MAPK)是细胞内的一类丝氨酸苏氨酸蛋白激酶,是真核细胞转导细胞外信号到细胞内引起细胞反应的一类重要信号系统,目前研究发现P38MAPK信号转导途径在椎间盘退变过程中可能处于枢纽地位,对炎症、应激反应的调控密切相关,其中基质金属蛋白酶3(matrix metalloproteinase 3,MMP-3)、基质金属蛋白酶7(matrix metalloproteinase 7,MMP-7)的表达在椎间盘退变组织中表达明显增加[3]。但是,腰椎间盘退变是一个非常复杂的过程,如何使退变椎间盘再生修复成为生物学上研究的热点,也是临床治疗上的难点。本研究在中医学思想指导下,发挥中医特色,采用补肾活血方对兔髓核间充质干细胞(nucleus pulposus-derived mesenchymal stem cells,NPMSCs)移植治疗退变椎间盘,旨在探索补肾活血方联合NPMSCs移植对P38MAPK信号通路的影响,为临床诊治退变椎间盘提供实验依据。

    1 材料与方法

    1.1 实验动物及分组

    128只SPF级健康新西兰大白兔,雌雄不限,兔龄6～12月,体重(2.54±0.28)kg,购自广东省医学实验动物中心,生产许可证号：SCXK粤2019-0002。在室温、安静环境下单笼饲养,模拟昼夜光12小时轮换,供应足量的食物和水。其中2只用于NPMSCs的获取、纯化及培养,24只用于假手术组(A组)；余102只兔退变椎间盘模型造模过程中死亡2只,成功造模100只,随机选取48只为模型组(B组,24只)、补肾活血方组(C组,24只)；最后52只经NPMSCs移植后死亡4只,余48只随机分为NPMSCs移植组(D组,24只)、补肾活血方+NPMSCs移植组(E组,24只)。

    1.2 主要试剂及仪器

    兔抗人单克隆抗体 P38MAPK、MMP-3、MMP-7免疫组化试剂盒购自上海信裕生物科技有限公司。组织脱水机、石蜡包埋机、切片机、摊片机、烘片机、显微镜均为广东省医学实验动物中心提供 ......