陈燕妮 王兰兰 查青 史海龙 冯雪松 晁旭

    中医药在治疗肿瘤方面有着上千年的经验积累，中医学者在肿瘤免疫和重塑肿瘤微环境以及诱导细胞凋亡和自噬[1]等多个方面研究中药单味药、复方药对肿瘤的治疗作用。实验组前期研究表明，贝参茱萸方含药血清对HepG2细胞的生长具有抑制作用，其抑制作用与含药血清的浓度具有相关性，贝参茱萸方含药血清能够诱导HepG2细胞发生凋亡，将细胞周期阻滞于G1期[2]。本实验通过贝参茱萸方对H22肝癌荷瘤小鼠肿瘤的抑制作用和机制进行研究，进一步评价中医药治疗肿瘤的效果。

    1 材料与方法

    1.1 实验动物

    SPF级40只雄性昆明小鼠，周龄为6～8周，购自北京维通利华实验动物技术有限公司，实验动物编号：SCXK(京)2016-001。

    1.2 药物与试剂

    贝参茱萸方处方：土贝母20 g、西洋参15 g、绞股蓝10 g、山茱萸10 g、生甘草5 g。购自陕西中医药大学校医院。将60 g中药材先加1000 mL的超纯水浸泡2小时，然后加热煎煮1小时倒出药液，再次加入1000 mL的超纯水煎煮1小时，分离药渣，保留所煎出的药液。将第1次和第2次药液混匀，继续熬制药物将药物调制为1 g·mL-1、0.5 g·mL-1、0.25 g·mL-1三个不同浓度于-4℃冰箱储存；H22细胞(编号：ZQ0109)购自上海茂科生物科技有限公司。

    1.3 瘤细胞悬液的制备

    将冻存H22细胞复苏，传代2次后，用PBS溶液将细胞调制成1×107个/mL的细胞混悬液。然后将0.1 mL瘤细胞混悬液接种在2只昆明小鼠的腹腔内，7天后，小鼠腹腔内长满瘤性腹水。用1 mL无菌针管抽取小鼠的腹水，1000 rpm 离心5分钟，然后用生理盐水调制成1×107个/mL瘤细胞混悬液，备用。

    1.4 实验动物分组及给药

    40只昆明小鼠适应性饲养一周，于造模前12小时禁食不禁水，造模当天用随机分组法将40只小鼠分为5组，分别为空白组、模型组、贝参茱萸方高浓度组、贝参茱萸方中浓度组、贝参茱萸方低浓度组 ......