夏瑶丹 曹芳 杨浩婕 李国栋 顾潇枫 刘浩歌 庞庆禄 焦扬

    特发性肺纤维化(idiopathic pulmonary fibrosis，IPF)是一种原因不明的，病情呈进行性加重的间质性肺疾病，主要临床表现为渐进性、不可逆的呼吸困难，死亡率高，目前西医尚未有理想有效的药物。转化生长因子β1(transforming growth factor-β1，TGF-β1)是目前研究发现的最主要的致纤维化因子，由哺乳动物的巨噬细胞等合成并释放。Patricia J.Sime等[1]首次利用腺病毒载体将TGF-β1转入大鼠体内，成功复制出肺纤维化模型。经过多年临床观察[2-3]及实验研究[4-5]，已证实肺痹汤对肺纤维化有显著改善作用。本研究所用银甘汤由金银花和生甘草组成，均是肺痹汤的主要组成部分，方中金银花辛凉解表，清热解毒，现代药理研究证实有抗炎、调节免疫作用[6]；生甘草清热解毒，祛痰止咳，调和诸药，现代药理研究证实有抗炎、抗纤维化、调节免疫作用[7-8]。本实验在前期研究基础上，以TGF-β1重组腺病毒载体诱导肺纤维化小鼠模型为研究对象，观察银甘汤对小鼠肺纤维化的影响，探讨其作用机制，为临床治疗提供理论依据。

    1 材料与方法

    1.1 实验动物

    SPF级C57BL/6雄性小鼠40只，7～8周龄，体重(22±2)g，购自斯贝福(北京)生物技术有限公司，动物生产许可证编号：SCXK(京)2016-0002，所有小鼠饲养于北京中医药大学科研中心动物室，环境温度20～25℃，相对湿度60%～70%，12小时/12小时明暗周期照射，自由饮水与进食。适应性喂养一周后使用。

    1.2 试剂与仪器

    1.2.1 主要试剂 银甘汤制备：银甘汤颗粒剂按照金银花与生甘草3∶1比例制备，每付颗粒40 g，购自北京康仁堂药业有限公司。将颗粒剂用100度开水冲泡后，调整浓度为0.6007 g/mL。质粒小量快速提取试剂盒(离心柱型)(北京艾德莱生物科技有限公司)；限制性内切酶类(美国Thermo Fisher Scientific公司)；DNA Ligase(北京合生基因科技有限公司)；腺病毒包装试剂盒(北京合生基因科技有限公司)；EpFectTMTransfection Reagent(北京合生基因科技有限公司)；EvaGreen?qPCR 2×Master Mix(北京合生基因有限公司)；DMEM高糖培养基(美国Gibco公司)；RPMI 1640培养基(美国Gibco公司)；胎牛血清(美国Gibco公司) ......