王德好 丁晓庆 刘军霞 郭明 廖俊尧 李玲 谌海燕

    再生障碍性贫血(aplastic anemia，AA)是一种骨髓造血功能衰竭综合征，可发生于各年龄组，临床以血三系减少为主要表现，其实质是T淋巴细胞异常活化、功能亢进造成骨髓损伤[1]。其中，调节性T细胞(regulatory T cell,Treg)/辅助性T细胞17(helper T type 17,Th17)细胞的免疫失衡是AA发病的重要机制之一[2-3]。课题组前期使用科室经验方再障膏方联合环孢素治疗AA显示出良好的临床效果，而进一步的动物实验也证实了再障膏方联合环孢素能明显改善AA模型小鼠外周血及Treg/Th17细胞失衡状态[4]。我们将前期实验小鼠的脾脏进行分析，使用蛋白免疫印迹法(western blot，WB)检测各组叉头状转录因子3(forkhead box protein 3,FOXP3)、GATA结合蛋白3(GATA binding protein 3,GATA-3)、T细胞特异性转录因子(transcription factor T-bet,T-bet)及Notch1蛋白表达水平，分析其变化及与Treg/Th17细胞变化的关系，以期为AA的临床治疗及进一步研究提供方向。

    1 材料与方法

    1.1 实验动物

    近交系SPF级BABL/c小鼠，雌性56只，8～12周龄，18～22 g。购买于北京维通利华实验动物技术有限公司，动物合格证号SCXK(京)2016-0010。

    1.2 主要药品及试剂

    白消安(粉末)为上海迈瑞尔化学技术有限公司产品。环孢素软胶囊为杭州中美华东制药有限公司产品；再障膏方由北京中医药大学东方医院制剂室统一浓煎呈膏状，药剂室进行药材质量控制(主要成分为炙黄芪30 g、党参15 g、白术15 g、陈皮15 g、茯苓15 g、川芎15 g、当归15 g、白芍15 g、生地黄15 g、丹参30 g、杜仲15 g、续断15 g、桑寄生15 g、龟板胶10 g、鹿角胶10 g、女贞子15 g、墨旱莲15 g)。PE-Cy5标记的CD3单克隆抗体、FITC标记的CD4单克隆抗体、PE标记的CD25单克隆抗体、BV421标记的RORyt抗体、FcR阻断剂(CD16/32)均为美国BD Pharmigen公司产品 ......