赵崇军 李二文 李芝奇 范琦琦 魏静 赵霞 林瑞超

    芫花(FlosGenkwa)为瑞香科植物芫花的干燥花蕾，广泛分布于中国长江流域各省和黄河流域的部分地区，具有泻水逐饮、杀虫疗疮的功效[1]。现代药理学研究表明，芫花具有镇痛抗炎[2-3]、免疫调节[4]、抗肿瘤[5]等诸多药理作用，但毒性限制了其临床应用。现有研究表明芫花对多个脏器存在毒性作用，向丽华等[6]研究24种中药的长期毒性，表明芫花对肝脏、肺、肾脏、卵巢等七个脏器存在毒性作用；赵一等[7]研究表明芫花对家兔具有显著的皮内刺激性和眼结膜刺激作用。可见芫花的毒性越来越受重视。肝脏是药源性损伤的主要靶器官之一，而中药是引起慢性药物肝损伤的重要原因之一[8]，目前基于传统用药方式对芫花水提物的肝损伤研究尚且有限。本实验室前期工作中基于斑马鱼模型已完成多种有毒中药的评价，并且通过评价斑马鱼肝脏表型、肝面积、部分酶活性等指标，已确定芫花水提物会诱导斑马鱼幼鱼肝脏肿大、出血、肝细胞凋亡等[9]，但其对斑马鱼肝脏的毒性具体机制尚不明确，本研究基于斑马鱼模型对芫花水提物的肝毒性机制进行深入探讨，以期对芫花的临床应用和推广提供参考。

    1 材料与方法

    1.1 材料

    斑马鱼循环水养殖系统(北京爱生科技公司)；BX51荧光显微镜(日本奥林巴斯集团)；200 μL、1 mL、5 mL移液器(德国Eppendorf公司)；LRH-250Z型恒温生化培养箱(广州沪瑞明仪器有限公司)；RJLDL-50G型离心机(无锡瑞江分析仪器有限公司)；HZQ-QX型全温振荡箱(哈尔滨市东联电子技术开发有限公司)；HQ10-20H超纯水仪(长沙聚丰环保科技有限公司)；Epoch2微孔板分光光度计酶标仪(美国伯腾仪器有限公司)；UV-2000紫外-可见分光光度计(尤尼柯上海仪器有限公司)。Nanodrop 2000凝胶电泳结合紫外分光光度(美国赛默飞世尔科技公司)；QuantStudio 3荧光定量PCR仪(美国赛默飞世尔科技公司)。

    Caspase-3活性检测试剂盒(北京拜尔迪生物技术有限公司，批号G015)，TransZol Up Plus RNA Kit (北京天根生化科技有限公司，批号ER501)，FastKing cDNA第一链合成试剂盒(北京天根生化科技有限公司，批号KR116)，RNA保护液(北京拜尔迪生物技术有限公司，批号r1100)，4%多聚甲醛(北京生物科技有限公司，批号p1110)，油红O染料(北京拜尔迪生物技术有限公司，批号s19039-100g) ......