邓宇童 蔡玲玲 任雪雯 李雪 胡博 冯蕙裳 杭小涵 赵欣楠 于心荟 李元文

    特应性皮炎(atopic dermatitis，AD)是一种以湿疹样皮疹、瘙痒、局部干燥等症状为特征的慢性、复发性、炎症性皮肤病[1]。近年来，AD在中国的发病率增长迅速。目前相关研究发现，新生的表皮神经纤维与AD的发病关系密切[2-4]。表皮神经纤维的生长受到神经生长因子(nerve growth factor, NGF)和信号素3A(semaphorin3A,Sema3A)双向调控，同时还有其他相关因子共同参与。当AD发病时皮肤屏障被破坏，表皮新生神经纤维密度增加，而通过调控Sema3A/NGF及相关分子水平，可以减少AD病患皮损部位新生表皮神经纤维的密度，减轻皮肤炎症，改善AD临床症状[5]。本团队通过前期临床观察发现，应用青石止痒软膏治疗湿疹[6-8]、银屑病[9-10]、神经性皮炎[11-14]及AD等炎症性皮肤病疗效显著，相关作用机制研究有待完善。故本研究以不同浓度青石止痒软膏干预2，4-二硝基氯苯(2,4-dinitrochlorbenzene，DNCB)诱导的小鼠AD模型，观察皮损症状评分、组织病理学改变、Sema3A/NGF及其相关信号分子表达的情况，从分子水平探讨青石止痒软膏治疗AD的作用机制。

    1 材料与方法

    1.1 实验动物

    SPF级雌性BALB/C小鼠56只，8周龄，购于斯贝福(北京)生物技术有限公司，动物质量合格证号：110324201103138756；实验动物生产许可证号：SCKX(京)2019-0010。于北京中医药大学东方医院SPF级动物房适应性喂养1周后开始实验。

    1.2 实验药物、主要试剂及仪器

    阳性对照试剂为丁酸氢化可的松(尤卓尔，天津药业集团有限公司，批号：20061033)；阴性对照试剂为青石止痒软膏所用基质软膏，由北京中医药大学东方医院皮肤科外治室制备，将橄榄油、蜂蜡按照10∶1配置而成；不同浓度青石止痒软膏由北京中医药大学东方医院皮肤科外治室制备，将青黛20 g、煅炉甘石60 g、煅石膏30 g、苦参30 g、黄柏30 g加8倍量70%乙醇，加热回流提取，离心过滤，合并提取液，减压回收乙醇并浓缩为1g生药/mL提取液浓度的浸膏，冰片10 g趁热加入浓缩液中混合均匀，闷润30分钟，过滤，蒸干后加入基质软膏，配制含药量不同的青石止痒高浓度软膏(0.36 g/g)、中浓度软膏(0.18 g/g)、低浓度软膏(0.09 g/g)。

    Trizol(美国Invitrogen公司 ......