于大远 李维康 李雪 刘立阳 刘仍海

    功能性便秘(functional constipation, FC)属于慢性便秘的一种，指排除肠管器质性病因，没有结构异常或代谢障碍，无药物等继发性因素所致的便秘。研究表明，很多常年便秘的患者，往往会存在肠道菌群的失调。当今现代医学治疗FC常采用泻剂、促动力药物、促分泌剂、灌肠剂及栓剂等药物治疗，或生物反馈治疗等物理因子治疗，或手术治疗等方法，虽短期疗效较好，但是远期疗效欠佳，且易致药物依赖、结肠黑变病、肠道菌群失衡等不良反应[1]。中医治疗FC具有疗效明确，副作用小等优点，近些年研究发现，通过中药干预可改善肠道菌群。中医认为便秘有实秘和虚秘之分。因为针对气血两虚型FC，本课题组采用自拟益气养血方，疗效较好。为观察其对肠道菌群的影响，本研究通过大黄灌胃联合尾静脉放血建立气血两虚型FC大鼠模型，观察自拟益气养血方对大鼠的一般情况、粪便重量，以及对肠道菌群的多样性(α多样性、β多样性)和各菌种丰度的影响。

    1 材料与方法

    1.1 实验动物

    本研究使用SD清洁级雄性大鼠50只，体质量为(200±20)g，8周龄，购自北京华阜康生物科技股份有限责任公司，动物许可证编号SCXK(京)2019-0028，饲养于SPF级动物室，恒定室温及湿度(22℃～25℃，50%～60%)，通风干燥，昼夜光照恒定12/12小时，不限饮食水。适应环境 1 周。

    1.2 实验药物、试剂与仪器

    中药自拟益气养血方颗粒，组方：人参15 g、黄芪20 g、生白术30 g、肉苁蓉15 g、当归10 g、生地黄15 g、白芍10 g、川芎10 g、杏仁9 g、柏子仁10 g、玄参10 g、麦冬10 g、郁李仁15 g、火麻仁15 g、桃仁10 g。核酸纯化试剂盒(货号：A63881，美国贝克霍特曼容克特有限公司)；高保真PCR试剂盒(货号：KK2631，美国KAPA)；PCR 扩增仪(货号：KK2631，赛默飞世尔科技有限公司)；荧光定量仪(赛默飞世尔科技有限公司)；LightCycler实时定量 PCR 仪(Roche Inc)；图像分析软件(美国Media Cybernetics)。

    1.3 造模与分组

    综合参考童卫东、许新晖、杜丽东[2-4]等人的造模方法，制备气血两虚型FC大鼠模型。随机抽取10只大鼠为空白组，每日定时给予空白组纯净水10 mL/kg。其余40只给予大黄溶液10 mL/kg，其中大黄的给药浓度需按一定规律每日200 mg/kg递增至终浓度为3600 mg/kg饲养3个月 ......