焦谊 刘志凤 于天源 张英琦 刘迪 王厚融 徐亚静 官乾

    发热作为儿科常见的症状之一，发生率为25.7%，每人每年约0.8次[1]。长期发热或体温过高则会损害机体调节功能，使病情恶化。小儿推拿退热具有安全性和有效性[2]，其中以开天门[3]138、推坎宫[3]138、揉太阳[3]138-139、揉耳后高骨[3]151、清天河水[4]、推脊[5]手法最为常用，现有小儿推拿退热研究不深入，受到社会质疑。故选取脂多糖(lipopolysaccharide，LPS)模型模拟临床细菌性发热，LPS作为toll样受体4(toll-like receptor 4,TLR4)公认的配体，能刺激机体产生炎症反应，核转录因子-κB p65(nuclear factor-κB p65,NF-κB p65)参与机体免疫调节、炎症反应、感染、细胞周期调控、细胞分化及凋亡等[6]，发热过程以炎症介质如肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis factor-α，TNF-α)、白细胞介素1β(interleukin-1β，IL-1β)最为重要，故以退热六法为例，设计实验进行深入研究。

    1 材料及方法

    1.1 实验动物

    清洁级2月龄新西兰幼兔24只，体质量(2000±200)g，肛温(39.00±0.50)℃，雌雄各半，购自北京隆安实验动物养殖中心[合格证号为SCXK(京)2019-0006]。饲养于北京中医药大学动物实验室，温度(25±0.5)℃，相对湿度(65±5)%，12小时/12小时明暗周期，自由饮食饮水。适应性饲养3天，排除肛温波动大于0.4℃的新西兰兔。实验程序经北京中医药大学动物使用和管理委员会批准，符合动物福利与伦理原则。

    1.2 仪器及试剂

    主要试剂：大肠杆菌内毒素脂多糖(美国Sigma公司；批号：055：B5 L2880)；BCA蛋白浓度测定试剂盒(北京索莱宝科技有限公司；批号：PC0020)；TLR4抗体(批号：bs-20594R)、NF-κB p65抗体(批号：bs-0465R)、GAPDH抗体(批号：bsm-0978M)以上试剂均购自北京奥博森生物科技有限公司。

    主要仪器： ChemiDoc MP成像仪(美国BIO-RAD公司)；MultiSkan3酶标仪(美国THERMO公司)；BL-420N(成都泰盟软件有限公司)、动物五分类血细胞分析仪(优利特URIT-5160Vet) ......