晏烽根 吴清 吴汶丰 刘俊峰 贾金靖 叶思祺 张瑜 莫秀梅 陈达灿

    特应性皮炎(atopic dermatitis, AD)是最为常见的慢性炎症性皮肤病，AD终生患病率高达20%，瘙痒是严重影响患者生活质量的因素之一[1]。瘙痒—搔抓的恶性循环可进一步破坏皮肤屏障，加重瘙痒和皮肤炎症反应。肥大细胞在免疫球蛋白E(immunoglobulin E, IgE)介导的皮肤风团反应及其相关的AD瘙痒中至关重要，肥大细胞作为特应性皮炎的关键效应免疫细胞之一，通过增殖活化释放炎症介质或与神经系统的双向相互作用参与了特应性皮炎的病理机制及疗效作用[2-6]。基于特应性皮炎心火脾虚的中医核心病机，笔者团队总结形成了培土清心方，前期研究表明培土清心方可减轻特应性皮炎小鼠模型瘙痒症状及减少肥大细胞浸润[7-8]，然而相关作用机制尚不清楚。研究显示，肥大细胞增生与C-kit基因点突变尤其是Asp816Val(D816V)及 Val560Gly(V560G)的位点突变密切相关[9]，已广泛采用细胞株HMC1.1(V560G位点突变)与HMC1.2(D816V和V560G两个位点突变)用于开展研究[10]。故本研究通过体外实验探讨培土清心方对人肥大细胞HMC1.1突变株与HMC1.2突变株细胞增殖活性及对HMC1.1突变株相关信号通路的影响，为培土清心方治疗特应性皮炎的疗效机制提供数据支撑。

    1 材料与方法

    1.1 实验细胞及培养条件

    人肥大细胞突变株HMC1.1：突变位点为C-kit蛋白中的560位点，由缬氨酸(Val)突变为甘氨酸(Gly)即：氨基酸密码子由GTC到GGC(V560G)；人肥大细胞突变株HMC1.2(560，816)：突变位点为C-kit蛋白中的Val560Gly(V560G)及816位点，由天冬氨酸(Asp)突变为缬氨酸(Val)即：氨基酸密码子由GAC到GTC(D816V)均购自美国Millipore。

    细胞培养在10%胎牛血清(Fetal bovine serum，FBS)的IMDM培养基中。细胞培养条件为37℃，5%的CO2条件下培养。

    1.2 试验药物及其制备

    培土清心方已获得专利授权(专利号：ZL2013 1 0328668.4)，处方：白术10 g、连翘10 g、太子参10 g、白茅根15 g、白鲜皮10 g、山药15 g、薏苡仁10 g、甘草5 g、珍珠粉0.3 g。培土清心方的浸膏由广东省中医院广东省中医药科学院黎雄博士课题组自制(编号：20190103) ......