刘新燕 王羽 尚峰 孙建翔 王敏慧 徐勤

    中医药在防治心血管疾病方面具有独特的优势。姜科植物大多为多年生草本，具有芳香性，包含很多著名的药材和香料植物[1]。姜叶三七[Stahlianthusinvolucratus(King ex Bak.) Craib]又名土田七，为姜科植物姜叶三七的干燥块根，具有活血化瘀、消肿止痛、止血散瘀的功效[2]。姜叶三七挥发油(Essential oil fromStahlianthusinvolucratusrhizomes, EOSIR)是从姜叶三七干燥块根中提取制备的一种油状液滴，主要成分包括单萜类、倍半萜类、酯类和芳香烃类化合物等。本课题组前期研究表明，EOSIR对损伤的内皮细胞具有很好的疗效。但目前对于姜叶三七及其主要有效成分挥发油在治疗心血管方面的药理作用研究在国内外未见报道。因此，本实验将继续深入探讨其在治疗动脉粥样硬化方面的药效及其作用机制。

    近年来，核因子E2相关因子2(nuclear factory erythroid-2 related, Nrf2)/抗氧化反应元件(antioxidant response element, ARE)信号通路一直是研究的焦点，是机体最为重要的内源性抗氧化应激和防御信号通路[3-6]。当机体处于生理状态时，细胞内的Nrf2被Keap1蛋白结合在细胞质中，使Nrf2处于一种非游离状态并且不断降解的非活性低水平状态。当受到亲电试剂的刺激或处于氧化应激条件下，细胞内的Nrf2解除偶联[7]，游离出Nrf2在细胞质中积累并转移进入细胞核与ARE相互结合，激活细胞保护基因，发挥保护细胞的作用[8-9]。

    本实验在EOSIR对血管内皮功能调控作用的基础上，提出EOSIR可通过Nrf2/ARE信号通路保护血管内皮损伤作用及其机制的假说，应用氧化低密度脂蛋白(oxidized low-density lipoprotein, ox-LDL)诱导血管内皮细胞建立氧化损伤模型，运用流式细胞术及实时荧光定量PCR(real-time quantitative PCR，RT-qPCR)、蛋白免疫印迹法(Western blot， WB)等现代分子生物学技术，探讨姜叶三七挥发油对损伤的血管内皮保护作用及其机制，旨在为姜叶三七资源的合理利用和开发提供一定科学依据。

    1 材料与方法

    1.1 细胞株

    人脐静脉内皮细胞(human umbilical vein endothelial cells，HUVECs)购自上海奥陆生物科技有限公司 ......