姚伟洁 杜博冉 李潇 冯欣

    血管生成参与了妊娠的全过程。血管生成伴随着子宫和脐带血流量增加，通过提供给胎儿充足的血液，从而促进胚胎的着床与发育[1]。血管生成异常，会导致流产的风险增加[2]。陈雷宁等[3]采用三维多普勒超声发现，复发性自然流产(recurrent spontaneous abortion，RSA)患者的子宫内膜血管化程度与正常妊娠女性相比较显著降低，表明血管生成异常是RSA患者的病理特征。研究表明，滋养层细胞功能缺陷导致的血管生成异常被认为是RSA最重要的原因之一[4]。因此，改善胎盘血管生成可以作为治疗RSA的有效方法。

    中药复方养血安胎颗粒是北京妇产医院临床应用30余年的院内制剂，在临床治疗RSA中具有确切的疗效[5-6]。研究发现养血安胎颗粒能够通过调节溶酶原活化物抑制因子-1治疗RSA[5]，而溶酶原活化物抑制因子-1是胎盘功能不全的标志，与血管生成密切相关[7]。课题组进而通过整合药理学结合Kyoto Encyclopedia of Genes and Genomes富集分析发现，养血安胎颗粒治疗RSA与调控血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor，VEGF)信号通路密切相关[8]。VEGF对血管生成发挥促进作用，是重要的血管生长调节因子[9]，但是养血安胎颗粒调控VEGF的机制尚缺少深入报道。研究发现，miR-16与VEGF的3-UTR互补，进而抑制人绒毛膜滋养层细胞和人绒毛膜癌细胞(JEG-3)中的VEGF表达，从而抑制血管生成[10]。

    研究发现，外泌体在滋养层细胞与子宫各种细胞的相互作用中发挥了重要的沟通作用，从而保证了血管生成和胎盘的正常发育[11]，养血安胎颗粒能否通过外泌体作为媒介调控VEGF以促进血管生成仍不清楚。故本实验以养血安胎颗粒为治疗药物，滋养层细胞和人脐静脉内皮细胞(human umbilical vein endothelial cells，HUVECs)为研究对象，血管生成和外泌体为切入点，探讨养血安胎颗粒调控VEGF以促进血管生成的机制。

    1 材料与方法

    1.1 实验动物、实验细胞及培养

    20只SD雄性大鼠，鼠龄6～8周、体质量(200±20)g、购自北京维通利华实验动物技术有限公司，实验动物许可证编号：SCXK(京)2016-0006。

    人绒毛膜癌细胞(JEG-3)、人脐静脉内皮细胞(HUVECs)均购自武汉普诺赛生命科技有限公司；JEG-3细胞及HUVECs均培养在25 cm2培养瓶中 ......