李晓民 梁韦巍 韩志强 李君 范崇帅 刘志香

    皮肤鳞状细胞癌来源于皮肤的鳞状上皮组织，是好发于老年人的常见皮肤恶性肿瘤之一[1]。至今关于皮肤鳞状细胞癌的病因和发病机制尚未明确，可能与化学致癌剂、慢性炎症等有关。了解皮肤鳞癌的发病机制，对于其诊疗具有重要的意义。PI3K/Akt信号通路是参与肿瘤细胞增殖、凋亡、侵袭等过程的重要通路，其激活可促进肿瘤细胞生长[2]。

    葡萄籽原花青素(grape seed proanthocyanidin，GSP)是从葡萄籽中提取的一类活性物质，具有抗氧化、抗炎等广泛生物活性[3-4]。目前多种中医药成分已被证实具有广泛的抗肿瘤活性[5]，GSP作为一种营养补剂已被广泛使用，对乳腺癌、结肠癌、皮肤癌等具有良好的抗肿瘤作用。虽然已有报道GSP能诱导多种恶性肿瘤凋亡，但对人皮肤鳞状细胞癌的凋亡机制尚不明确。本实验使用体外培养的人皮肤鳞状细胞癌A431细胞观察GSP诱导细胞凋亡的作用，并从PI3K/Akt信号通路探讨其对人皮肤鳞状细胞癌细胞凋亡的影响。

    1 材料与方法

    1.1 实验细胞

    人皮肤鳞状细胞癌细胞株(A431细胞，编号：KCB200651YJ)购自中国科学院细胞库。

    1.2 细胞培养

    用含10%胎牛血清的DMEM培养基于37°C、5% CO2条件下的二氧化碳孵箱中常规培养人皮肤鳞状细胞癌A431细胞[6]。具体操作如下：使用灭菌的PBS缓冲液清洗细胞3遍，加入0.25%的胰酶消化液消化细胞，显微镜下观察细胞变圆后加2 mL培养基终止消化，转移到15 mL离心管中离心，弃掉上清液加新鲜培养液重悬细胞，传代培养。

    1.3 实验试剂

    GSP(货号: 29106-49-8)购自美国Sigma公司。MTT试剂(货号：88417)购自美国Sigma公司。兔抗p-PI3K(货号：bs-5570R)、PI3K(货号：bs-6417R)、p-Akt(货号：bs-2849R)、Akt(货号：bs-0115R)、cleaved caspase-3抗体(货号：bs-0087R)购自北京博奥森生物技术有限公司 ......