梁芳 鲁卫星 周天琪 王胤博

    经皮冠状动脉介入治疗、冠状动脉旁路移植术等冠脉再通技术是把双刃剑，在改善缺血的同时往往会造成心肌再灌注损伤，加重病情[1]。减轻血管再通后的心肌缺血再灌注损伤(myocardial ischemia/reperfusion injury, MIRI)成为临床亟待解决的问题。研究表明，铁死亡参与了MIRI的发生过程[2]，抑制铁死亡可减轻MIRI[3]。细胞铁死亡有可能成为心肌缺血再灌注新的治疗靶点。

    龙牙楤木为五加科楤木属植物，其味辛、微苦，性平，具有益气活血、止痛、祛风湿等功效。实验研究发现，龙牙楤木总皂苷或其组分能通过减轻钙超载、减轻氧化应激及炎症反应等途径减轻MIRI[4-6]，但其能否通过调节铁死亡减轻MIRI仍不明确。因此，本研究通过观察龙牙楤木总皂苷及其组分楤木皂苷A对缺氧/复氧AC16心肌细胞铁死亡的影响，探讨其是否能够调控心肌细胞铁死亡，并通过该机制缓解MIRI。

    1 材料与方法

    1.1 细胞及细胞培养

    人AC16心肌细胞购自美国模式培养物集存库(American Type Culture Collection，ATCC)。将细胞培养于含10%胎牛血清、100 U/mL青霉素、100 U/mL链霉素的DMEM培养基(完全培养液)中，在常氧培养箱(5%CO2、21%O2、74%N2)、37℃条件下培养，每1～2日换液一次。取生长良好的对数生长期细胞用于实验。

    1.2 实验药物

    龙牙楤木总皂苷由吉林省中医药研究院提供，楤木皂苷A购自上海源叶生物公司(批号：B20219)，用二甲基亚枫溶解，以上药物均分装贮存于-80℃冰箱，取用时室温溶解，用DMEM培养液释至所需浓度。

    1.3 主要实验试剂

    DMEM培养基购于美国Hyclone公司(货号：SH30022.01)；胎牛血清购自美国Gibco公司(批号：1861242)；PBS缓冲液购于上海碧云天生物公司(货号：C0221A)；CCK-8试剂盒购于同仁化学研究所(货号：CK04)；LDH试剂盒购自上海碧云天生物公司(货号：C0017)；铁离子试剂盒购自北京普利莱基因技术公司(货号：E1042)；MDA试剂盒(货号：E-EL-0060c)、GSH试剂盒购于武汉伊莱瑞特公司(货号：E-EL-0026c)；荧光探针-DHE购于南京凯基生物公司(货号：KGAF019)；P53、SLC7A11、SAT1、GLS2抗体购于美国CST公司(货号分别为2524S、12691S、61586S、ab113509) ......