王文萱 张云封 罗扬淦 廖晗婧 刘莉 张仕林 屠鹏飞 朱枝祥 李军

    血人参为豆科蝶形花亚科(Papilionoideae)木蓝属植物茸毛木蓝IndigoferastachyodesLindl.的干燥根[1]，是贵州省少数民族特色苗药。在《贵阳民间药草》记载血人参具有“补血活血”的功效[2]；在《全国中草药汇编》记载血人参具有“解表祛湿，止痛，止血”的功效，主治感冒咳嗽，头痛，小儿痰哮，胃痛，黄疸，心绞痛，腰痛，子宫出血，乳癌初起，风湿性关节炎，疔疮，毒蛇咬伤[3]。然而，目前对血人参的现代药理学研究资料十分缺乏，中医临床中对血人参的利用受到严重制约。

    本研究前期实验从血人参中提取分离了大量黄酮类化合物，通过初步生物活性筛选，发现从血人参中分离出的化合物异甘草素对脂多糖(lipopolysaccharide, LPS)诱导巨噬细胞释放一氧化氮(nitric oxides, NO)具有很强的抑制作用，可能对巨噬细胞和中性粒细胞的活化及炎症反应具有抑制作用。因此，本研究将利用LPS诱导小鼠巨噬细胞和原代中性粒细胞活化模型[4-5]，研究异甘草素的抗炎活性及其作用机制，以揭示血人参中发挥抗炎作用的有效成分及作用机制。

    1 材料与方法

    1.1 细胞株和动物

    小鼠巨噬细胞系RAW264.7，购自中国医学科学院基础医学研究所细胞中心。8～10周龄雄性C57BL/6小鼠，动物合格证号：1100112011044776，购自北京维通利华实验动物技术有限公司。

    1.2 实验试剂与仪器

    血人参由贵州汉方药业有限公司提供，经北京中医药大学李军研究员鉴定为豆科蝶形花亚科木蓝属植物血人参真品；异甘草素由李军课题组经硅胶、Sephadex LH-20柱色谱和半制备高效液相色谱技术分离纯化，纯度大于95%。

    胎牛血清(货号35-081-CV)、DMEM细胞培养基(货号10-013-CVR)、0.25 %胰蛋白酶(货号25-053-CI)、青霉素和链霉素混合液(货号30-002-CI)购自美国Corning公司；细胞增殖及细胞毒性检测试剂盒(货号 C009S)购自上海碧云天生物技术有限公司；Trizol试剂(货号A33254)购自美国Thermo Fisher Scientific公司；氯仿、异丙醇购自国药集团化学试剂有限公司；一氧化氮检测试剂盒(货号BR45002)购自北京佰瑞达生物科技有限公司；逆转录试剂盒(货号AT301-02)和实时荧光定量PCR试剂盒(货号AQ141-02)购自北京全式金生物技术有限公司；肿瘤坏死因子(tumor necrosis factor-α, TNF-α)、白细胞介素-6(interleukin-6, IL-6)、白细胞介素-1β(interleukin-1β, IL-1β)、巨噬细胞炎症蛋白-1α(macrophage inflammatory protein-1, MIP-1α)、单核细胞趋化因子-1(monocyte chemotactic protein-1, MCP-1)和干扰素-β(interferon-β, IFN-β)甘油醛-3-磷酸脱氢酶(glyceraldehyde-3-phosphate dehydrogenase, GAPDH)等基因的实时荧光定量PCR引物购自上海生工生物工程有限公司；小鼠TNF-α(货号3511-1H-6)和IL-6(货号3361-1H-6)的酶联免疫吸附(enzyme linked immuno sorbed assay, ELISA)试剂盒购自瑞典Mabtech公司；小鼠MCP-1(货号555260)的ELISA试剂盒购自美国BD公司；干扰素-β(interferon-β, IFN-β)(货号DY8234-05)的ELISA试剂盒购自美国RD Systems公司 ......