甲炎康泰对自身免疫性甲状腺炎大鼠PI3K/Akt/mTOR信号通路的影响
滤泡,批号,1材料与方法,1实验动物,2实验药物,3实验试剂,4实验仪器,5实验方法,6指标检测,7数据处理,2结果,1各组大鼠外周血中TPOAb浓度测定,2各组大鼠甲状腺病理观察,3各
张秋娥 潘雅婧 张程斐 赵丹 吴丽丽 秦灵灵 刘铜华自身免疫性甲状腺炎(autoimmune thyroiditis,AIT)是由于多因子功能紊乱导致的一种器官特异性自身免疫性疾病,其临床诊断通过血清甲状腺过氧化物酶抗体(thyroid peroxidase antibody,TPOAb)和抗甲状腺球蛋白抗体(anti-thyroglobulin antibodies,TgAb)的阳性表达以确诊[1]。目前遗传易感性、环境因素、营养因素和免疫紊乱是公认的导致AIT发生的重要因素[2-3],但其病因未完全阐明,尚无针对病因的治疗手段。
磷脂酰肌醇3-激酶(phosphatidylinositol 3-kinase,PI3K)/蛋白激酶B(protein kinase B,Akt)/哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(mammalian target of rapamycin,mTOR)信号通路长期以来被认为是细胞代谢、生长、存活的关键调节因子,mTOR是细胞内自噬的主要抑制因子,它受到PI3K/Akt通路的正调节。临床研究通过提取桥本甲状腺炎患者甲状腺滤泡上皮细胞进行研究,发现自噬相关蛋白减少。甲状腺滤泡细胞自噬参与了桥本甲状腺炎的发展[4],激活PI3K/Akt/mTOR信号通路使AIT的症状加重[5-6]。因此,研究组推测甲炎康泰可能作用于PI3K/Akt/mTOR信号通路,参与了对细胞自噬的调节作用来改善AIT病情。
1 材料与方法
1.1 实验动物
SPF级Lewis大鼠30只,6周龄,雌性,体质量115~145 g。购于北京维通利华实验动物技术有限公司,许可证号:SCXK(京)2016-0006。
1.2 实验药物
甲炎康泰组方:柴胡10 g、郁金20 g、夏枯草30 g、穿山龙10 g、浙贝母15 g、玄参10 g、山慈菇6 g、黄芪30 g、乌梅15 g。甲炎康泰颗粒剂购于北京康仁堂药业有限公司,溶于去离子水,置于4℃冰箱储存。参考课题组前期实验结果,本实验给药剂量2.834 g/kg[7]。
1.3 实验试剂
碘化钠(玛雅试剂有限公司产品,批号:MA-YA-CR-2831),猪甲状腺球蛋白(Thyroglobulin from Porcine thyroid gland,PTg)(美国Sigma公司,批号:#018K7012),弗氏不完全佐剂(Incomplete Freunds Adjuvant,IFA)(美国Sigma公司 ......
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