徐幸杰 潘涛 樊慧杰 肖琪 和璐璐 李艳荣 贾璐 王利然 尉杰忠肖保国 马存根 张波 柴智

    帕金森病的发病率仅次于阿尔茨海默病,是第二大中枢神经系统变性疾病,其病理特征是黑质纹状体多巴胺能神经元的丢失和神经元蛋白质内含物“路易小体”的形成[1]。目前,帕金森病尚不能完全治愈,现代药物治疗副作用大,手术治疗风险高。中医药治疗帕金森病疗效确切,近期临床研究也表明中医药与现代治疗相结合,能够提高治疗效果,减少不良反应的发生[2]。课题组前期研究表明中医补肾方五子衍宗丸可以有效改善1-甲基-4-苯 基-1,2,3,6-四 氢 吡 啶(1-methyl-4-phenyl-1,2,3,6-tetrahydropyridine,MPTP)诱导的帕金森病小鼠的步态紊乱,减轻神经炎症和氧化应激反应,保护多巴胺神经元[3-5]。进一步的研究表明,五子衍宗丸主要活性成分金丝桃苷能够减轻鱼藤酮诱导的大鼠多巴胺神经元丢失和鱼藤酮诱导的SH-SY5Y人神经母细胞瘤细胞损伤,其机制与抑制多巴胺神经元凋亡和自噬有关[6]。在此基础上,本研究进一步探讨金丝桃苷对帕金森病模型小鼠小胶质细胞和LPS诱导的小胶质细胞(简称BV2细胞)M1/M2极化的调节作用,观察炎性细胞因子水平和极化相关蛋白表达变化,聚焦小胶质细胞极化,探究金丝桃苷对帕金森病模型的新机制。

    1 材料与方法

    1.1 金丝桃苷对帕金森病模型小鼠小胶质细胞M1/M2极化的影响研究

    1.1.1 实验动物 30只体质量为18～22 g的雄性C57BL/6小鼠(8周龄)由北京维通利华实验动物有限公司提供,合格证号:[SCXK(京)2016-0006]。小鼠在温度为20～25℃、湿度为40%～60%的条件下饲养1周后开始实验。

    1.1.2 试剂与仪器 金丝桃苷(分析标准品,≥98%,北京索莱宝科技有限公司,货号SH8310);MPTP(美国Sigma公司,货号M0896);肿瘤坏死因子α(tumor necrosis factorα,TNF-α)ELISA试剂盒、白介素-1β(interleukin-1β,IL-1β)ELISA试剂盒(上海酶联生物科技有限公司,货号ml002095、ml301814);酪氢酸羟化酶(tyrosine hydroxylase,TH)、磷酸化蛋白激酶B(phosphorylase B kinase,p-AKT)抗体(美国Cell Signaling Technology公司,货号58844、4685);离子钙接头蛋白抗原(ionized calcium bindingadapter molecule 1,Iba-1)、精氨酸酶-1(Arginase-1,Arg-1)、诱导型一氧化氮合酶(inductible nitric oxide synthase,iNOS)、驴抗小鼠IgG Alexa Fluor?647、驴抗兔IgG Alexa Fluor?555抗体(英国Abcam公司,货号ab5076、ab96183、ab49999、ab150107、ab150074);驴抗山羊IgG Alexa FluorTMPlus 488抗体(美国invitrogen公司,货号A32814);β-actin抗体(南京Bioworld公司,货号AP0060);辣根过氧化物酶(Horse Radish Peroxidase,HRP)羊抗兔IgG(武汉BOSTER生物工程有限公司,货号BA1055) ......