李矜 张晨 辛竞妍 吴长江 朱雨菲 张涛静

    糖尿病周围神经病变(diabetic peripheral neuropathy，DPN)是糖尿病患者中常见的慢性并发症之一，该病在糖尿病患者中的发病率超过60%[1]，目前有研究表明，DPN的发病与氧化应激及炎症反应等有关。DPN目前的西医治疗多采用控制血糖联合营养神经及减轻炎症反应等方法。有研究表明，单用西医治疗疗效劣于中西医同治，尤其中药复方制剂能作用于DPN发病机制的多个靶点[2]，成为近期研究热点。在对糖尿病周围神经病变的临床治疗及实验研究中，中药复方糖络宁制剂的疗效已经得到初步证实[3-6]，本课题组前期研究表明，糖络宁制剂能通过调控微小RNA表达有效改善高糖环境中大鼠背根神经节神经元细胞(dorsol root ganglion neurons,DRGn)细胞的氧化应激及细胞凋亡。本实验则是在体外研究的基础上探索糖络宁含药血清对高糖环境下miR-146a的调控及其对高糖诱导下的大鼠背根神经节细胞炎症反应的影响机制。

    1 材料与方法

    1.1 实验动物

    清洁级6～8周龄雄性SD大鼠20只及临产期雌性SD大鼠若干只，动物许可证号：SCXK(京)2016-0006，购买于北京维通利华实验动物技术有限公司。本实验期间饲养于北京中医药大学动物实验中心，饲养标准：大鼠SPF级屏障环境，中心温度(20±2)℃，湿度45%～65%，12小时明暗交替照明。本实验流程由北京中医药大学东方医院伦理委员会论证通过。

    1.2 实验药物

    糖络宁复方制剂(主要成分为生黄芪20 g、山茱萸9 g、川续断12 g、狗脊15 g、丹参15 g、全蝎6 g、木瓜10 g)，生药浓度为0.5 g/mL，本制剂制于北京中医药大学东方医院制剂室。

    1.3 主要试剂

    miR-146a激动剂(miR-146a mimics)由广州锐博生物公司合成；CCK-8(cell counting kit-8)试剂盒(011521210435)购自碧云天; DMEM(dulbecco’s modified eagle medium )(C11995500BT)、Neurobasal(神经基础)培养基(21103049)购自Gibco; SuperScript III RT 逆转录试剂盒 (ABI-invitrogen ......